BHK21细胞的悬浮驯化及其悬浮培养参数研究

田波 尚勇良 武发菊 安芳兰 万玉林 刘学荣 杨进才

摘要 [目的] 探讨各种悬浮培养条件对BHK21细胞悬浮培养的影响，尤其是细胞生长过程中出现的细胞结团现象对细胞生长状态的影响，从而摸索出稳定的培养条件。[方法]将BHK21细胞株进行悬浮驯化培养，通过对悬浮培养的培养液、pH、溶解氧、罐压、搅拌等各种细胞相关生长条件进行研究。[结果] 細胞的结团严重影响了细胞的生长代谢。最佳培养条件为最佳接种浓度0.2×106个/ ml，牛血清的最佳含量为5%，BHK21细胞培养液理想pH为7.0～7.2，采用2孔通气的100 r/min有利于BHK21细胞的生长。[结论] 为体外规模化细胞培养平台奠定理论基础。

关键词 BHK21细胞；细胞驯化；悬浮培养

中图分类号 S188 文献标识码

A 文章编号 0517-6611（2014）31-10855-03

Study on BHK21 Cell Suspension Adaptation and Culture Parameters in Suspension Condition

TIAN Bo1，2， SHANG Yongliang2，WU Faju2， LIU Xuerong2* et al （1.Gansu Agricultural University，Lanzhou，Gansu 730000；2.Zhongnong Weite Biotechndogy Co.Led.，Lanzhou，Gansu 730046）

Abstract [Objective] The aim was to discuss the effect of various cultivate condition on BHK21 cell suspension cultures，especially the effect of cell aggregation phenomenon of cell growth in the process of the cells growth state，and the stable culture condition were found out.[Method] The BHK21 cells were suspended domestication，cultivation of suspension culture by nutritive medium， pH，dissolved oxygen，tank pressure for mixing all kinds of cell growth conditions were studied.[Result] Cluster cells greatly influenced the growth of the cell metabolism.The best culture conditions were optimal inoculation concentration of 0.2×106 / ml，the best content of bovine serum 5%，the ideal BHK21 cell cultures of pH 7.0 - 7.2，the two ventilation hole 100 r/min speed of BHK21 cell growth.[Conclusion] The study laid a theoretical foundation for largescale cell culture in vitro platforms.

Key words BHK21 cells； The cellular acclimation； Cell suspension culture

随着兽用生物制品产业的发展，近年来动物细胞培养成为国内外研究的热点。BHK21细胞作为WHO推荐的生产兽用疫苗细胞，现已在规模化生产中用悬浮培养的模式在应用。目前人们为适应特定工业化的需要，通过改变细胞的生长方式和生活环境，对工程细胞进行贴壁―悬浮的驯化。贴壁培养细胞经过悬浮驯化可以转变为悬浮生长株^[1-2]，或添加抗剪切保护剂进行规模化悬浮培养。悬浮驯化过程中细胞易粘附聚集及结团是目前贴壁细胞进行悬浮培养常见的问题^[3-4]。由于动物细胞在悬浮培养条件下对生长环境、培养基的要求十分严格，优化BHK21细胞的悬浮培养条件，使之达到最佳生长状态，从而为体外规模化细胞培养平台奠定理论基础。……