结核分枝杆菌Rv3871抗原优势肽段的克隆表达及抗原性鉴定

郄霜，戴振华，杨锡琴，修冰水 ，陈堃 ，郭兰芹，冯晓燕，张庆波，张贺秋

1.河北联合大学，河北 唐山 063000；2.军事医学科学院 基础医学研究所，北京 100850；3.华北石油总医院，河北 任丘 062552

结核分枝杆菌感染所导致的结核病对人类健康依然是极大的威胁，全世界高达三分之一的人口是潜在的结核分枝杆菌感染患者，每年平均死亡人数达到170万[1]。目前我国结核病诊断及流行病学调查主要采用结核菌素纯蛋白衍化物（PPD）检测，但PPD检测包含的抗原复杂，导致难以区别结核杆菌感染和卡介苗接种，因此，寻找特异性更高、敏感性更强的抗原是目前结核病诊断研究的首要任务。

致病性结核分枝杆菌区别于卡介苗（BCG）的一个重要特征是，结核分枝杆菌的基因组中存在RD1区，而所有环境分枝杆菌及BCG中均缺失该区序列。研究表明，敲除RD1区的结核分枝杆菌H37RV与BCG疫苗株的毒力相当，因此推断RD1区与细菌的毒力有关[2]。我们对H37RV株RD1区的Rv3871抗原优势肽段进行了克隆、表达及纯化，初步检测了其抗原性，希望为结核病的临床检测提供新型抗原。

1 材料和方法

1.1 材料

所有血清均来自北京市朝阳区疾病预防控制中心，全部为临床新近诊断的活动性肺结核患者，未合并感染HIV，未接受抗结核治疗或治疗时间不超过2周；阴性对照组来自健康献血员。

结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA、大肠杆菌HB101由本室保存；在大肠杆菌中高效表达目的基因的载体pBVIL1由本室构建；实验所需DNA限制性内切酶XhoⅠ和XbaⅠ，及T4DNA连接酶均购自Promega公司。

1.2 抗原表位分析

用Biosun分子生物学软件对Rv3871抗原进行表位分析，将其分成3个优势抗原表位，分别为Rv3871-1、Rv3871-2和Rv3871-3。……