中红外指纹图谱快速定量评价野木瓜片质量

李文颖，孙国祥，宋爱华

(沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016)

野木瓜片 (Yemugua Tablet，YMGT)收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十四册［1］，由野木瓜煎煮后浓缩成浸膏，加适量淀粉而制成的单味中成药，为全浸膏片，不含植物组织。野木瓜中含有皂苷、黄酮、酚性成分，主要化学成分有齐墩果酸、熊果酸与绿原酸，还含有抗衰老重要物质超氧化物歧化酶 (SOD)即“液体黄金”，其饮料产品备受欢迎，因此野木瓜具有重要药用与食用价值。野木瓜片的功能为祛风止痛、舒筋活络，主治风邪阻络型三叉神经痛，坐骨神经痛，风湿关节痛。文献有HPLC法、紫外分光光度法［3］测定野木瓜片中绿原酸［2］，本实验以中红外指纹图谱 (IRFP)为基础用系统指纹定量法对野木瓜片进行快速定量评价。

1 中红外系统指纹定量法原理［4-7］

中药IRFP所表达的质量信息远比测试单一成分要丰富和准确。本实验建立IRFP定量法是以光谱点为计算单元(4000多个光谱点)，用宏定性相似度Sm监测红外指纹数量和分布比例，见 (1)式，用宏定量相似度Pm监测红外指纹含量状况，见 (2)式，并用指纹变动系数α限定红外指纹变异性，见 (3)式。xi与yi分别为样品和对照IRFP各峰点吸光度，mRFP和mi分别为对照IRFP和样品的称样量。用Sm、Pm和α把中药质量划分为8级见表1，该方法称为红外系统指纹定量法。

表1 红外指纹定量法鉴定中药质量等级标准

2 仪器与试药

2.1 仪器 Bruker IFS-55型傅立叶红外分光光度仪，DTGS型检测器 (瑞士布鲁克公司);AG285电子天平 (梅特勒-托利多上海仪器有限公司)，数据处理软件为中药红外指纹图谱超信息特征数字化定量评价系统4.0软件。

2.2 试药 KBr试剂 (国药集团化学试剂有限公司批号为F20100520);各批次野木瓜片皆购于沈阳各大药房，共购买15个批次。S1～S3、S8、S10、S11和S13来自于江西保利制药有限公司;S4、S5来自于广州莱泰制药有限公司;S6、S7、S9和S14均来自于广东和平药业有限公司;S12、S15均来自于贵港市冠峰制药有限公司。野木瓜的对照药材 (121224)购自中国食品药品检定研究院。

2.3 供试品对照药材KBr晶片制备 取野木瓜片15片，精密称定，除去薄膜衣并研碎成粉末，于40℃干燥24 h，取1～2 mg粉末，精密称定m，精密称取100～150 mg干燥的KBr粉末w1，在玛瑙研钵中研磨、混匀，转移到模具中，在低真空下用10 GPa左右的压力，经约2 min即可将样品压成透明薄片，精密称取供试品KBr晶片质量w2后，10 min内测试，样品真实质量计算方法见(4)式。

取野木瓜对照药材干燥，将其粉碎，过200目筛于40℃干燥24 h，取1～2 mg粉末，精密称定，精密称取100～150 mg干燥的KBr粉末，在玛瑙研钵中研磨、混匀，转移到模具中，在低真空下用10 GPa左右的压力，经约2 min即可将样品压成透明薄片。

2.4 测定条件 Bruker IFS-55型傅立叶红外分光光度仪，DTGS型检测器。波数范围为4000～400 cm－1，分辨率为8 cm－1，扫描速度为20次/s，升温速度2℃/min。样品扫描时扣除甲醇H2O和CO2的干扰。

3 实验结果

3.1 红外指纹图谱方法学考察 精密度试验 取野木瓜片样品S1进行红外光谱扫描，连续试验6次，用红外系统指纹定量法评价出指纹图谱算出Sm均＞0.99，宏定量相似度Pm的RSD为2.4%，表明仪器的精密度符合要求。

稳定性试验 取野木瓜片样品S1方法制备样品，每隔1 h进行一次光谱采集，分别在0、1、2、3、4、5、6 h进行采集。所得红外光谱图的定性相似度Sm均＞0.98，宏定量相似度Pm的RSD为2.6%，表明样品在测定时间内稳定。

重复性试验 取野木瓜对照药材制备供试品，按上述方法平行制备6份样品片，分别测定IRFP，计算所得红外光谱图的定性相似度Sm均＞0.97，宏定量相似度Pm的RSD为2.9%，表明方法重现性良好。

3.2 野木瓜片红外指纹图谱建立［8-12］按IRFP检测条件，将15批样品溴化钾晶片分别进行红外测定，记录4000～400 cm－1的中红外光谱。在3600～2900 cm－1和1600～400 cm－1为主要特征峰。根据文献野木瓜中含有黄酮、皂苷、酚类成分，3300 cm－1为－OH伸缩振动、2900 cm－1为-CH3伸缩振动吸收峰、1650 cm－1为C=O伸缩振动吸收峰、1000 cm－1为酚类的C-O伸缩振动吸收峰。化学成分以单键振动 (或转动)引起的光吸收叠加构成野木瓜片IRFP重要特征可作为野木瓜的鉴别手段。将此15批IRFP信号导入“中红外指纹谱超信息特征数字化评价系统4.0”软件，用野木瓜对照药材平行测6次，取平均值生成对照指纹图谱 (均谱)。运用SPSS 16.0软件以Sm和Pm为聚类分析指标进行系统聚类分析，结果样品被分为二类:S2、S3、S7、S8、S9、S12、S13、S15、S1、S5、S10、S11 和S14为第一类，S4和S6为第二类，见图1。用野木瓜的标准药材平行测定6次，取平均值生成对照指纹图谱(RFP)，以此RFP为标准用系统指纹定量法鉴别评价15批野木瓜质量，重新评价15批样品Sm和Pm(结果见图1，表2，图2)。

图1 15批野木瓜片系统聚类分析结果

表2 红外指纹定量法评价15批野木瓜片质量结果

3.3 野木瓜片整体质量评价 用红外系统指纹定量法评价出指纹图谱算15批野木瓜片Sm均＞0.94，证明各批样品的化学成分的种类和分布比例都很相似，但宏定量相似度Pm差异很大。鉴定结果为:S7和S9(1级)质量极好，S6、S8、S10、S12和 S15(2级)质量很好，S2、S3、S10、S13(3级)质量好，S14(5级)质量中，S1和S11(6级)质量一般，S5(7级)质量差，S4(8级)质量劣，见表2。

图2 15批野木瓜片 (S1－S15)红外指纹图谱和对照指纹图谱 (IR-RFP)

4 结论

中药成分复杂，每一味中药都有许多化学组成，其疗效成分不单单是一种起作用，因此对单一成分进行质量控制无法反映质量全貌，对中药进行全面质量控制才能控制中药发展的正确方向。本实验建立了野木瓜片IRFP实现了对其质量进行快速定性和定量鉴定，这为中药全质量控制提供了一种简单、便捷和可靠的快速分析方法。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准:中药成方制剂［S］.1991，14:150.

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