视网膜光损伤中TIMP-1、ERK-1的表达及促红细胞生成素对其影响△

王颖立 牛膺筠

近年的研究发现年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)的病理改变［1］与脉络膜和玻璃膜上的基质金属蛋白酶(metrix metalloproteinases，MMPs)和基质金属蛋白酶抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)水平的改变密切相关［2］。

众所周知，视网膜光损伤是研究视网膜变性类疾病(例如AMD)的良好动物模型［3］。因此本研究通过建立小鼠光损伤动物模型，着重观察视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞中金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)及细胞外信号调节激酶蛋白1(extracellular regulated proteinkinase-1，ERK-1)表达的变化，同时应用重组人促红细胞生成素(recombination human erythropoietin，rhEPO)进行小鼠腹腔注射，检测其产生的影响，以进一步完善我们对EPO视网膜神经保护作用的认识，从而为AMD的治疗寻求新的思路和方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物与分组 健康成年近交系 BALB/c小鼠52只(104眼)，4周龄，体质量18 g左右，购自山东医科大学动物实验中心，雄性，动物基因背景为Rpe65 450Leu450，对光损伤具有高度敏感性。严格遵守SPF级小鼠喂养条件。实验动物及实验使用条件符合国家科学技术委员会的《实验动物管理条例》。将动物随机分为单纯光照组(24只)、EPO处理组(24只)和正常对照组(4只)。其中前两组按光照后处死时间的不同又分为6 h、12 h、36 h、72 h、96 h和7 d 6个亚组，每个亚组各4只8眼。

1.1.2 主要试剂 TIMP-1兔 IgG多抗、ERK-1羊IgG多抗(美国 Santa Cruz公司)，封闭血清、复合消化液、PV6001免疫组织化学试剂盒、DAB显色试剂盒、APES黏片剂(北京中山生物技术有限公司)，生物素化兔抗山羊抗体(武汉博士德生物技术有限公司)，3000 U·mL－1rhEPO(沈阳三生制药公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 实验前准备 将单纯光照组和EPO处理组小鼠在12 h明/12 h暗的循环光照环境中喂养10 d，暗适应10 h。

1.2.2 动……