JAK2 V617F突变与真性红细胞增多症的研究进展

2014-11-15 06:44刘学文马宏杰
中外医疗 2014年21期

刘学文 马宏杰

[摘要] 真性红细胞增多症(PV)的发病与JAK2基因突变着密切关系。该突变通过过度激活JAK-STAT信号通路,诱导PV发生。目前,JAK2基因突变已经成为诊断PV的重要条件,JAK2抑制剂在临床前试验中初见成效,进入早期临床试验。该文就近年来JAK2 V617F基因突变在PV临床诊断及靶向治疗方面的进展及存在问题进行综述。

[关键词] 真性红细胞增多症;骨髓增殖性肿瘤;JAK2;V617F

[中图分类号] R55 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)07(c)-0194-03 真性红细胞增多症(Polycythemia Vera, PV),是一种原因未明的造血干细胞克隆性疾病,为骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative, MPN)中的一种,以红系细胞异常增殖为特点,红细胞过度增生引起全血容量增多及血液粘稠度增加,常伴白细胞和血小板增多,病情进展可出现骨髓纤维化或向急性白血病转化。临床表现有皮肤红紫、肝脾肿大、高尿酸血症、高血压等,可并发血栓栓塞和出血症状。PV的病因及发病机制尚不明了,临床上需要与继发性红细胞增多症相鉴别,对于一些病史、临床症状不典型的病例,鉴别上有困难。但近年发现JAK2酪氨酸激酶突变( JAK2 V617F)与PV有密切关系后, PV的诊断标准有了安突破性的进展。现综述如下。

1 PV发病机制的研究进展

红细胞生成素(erythrogenin,EPO)是由肾间质分泌的参与红系造血的重要内分泌激素,是生理条件下红细胞生成、增殖、分化、成熟的主要调控因素,其与红系祖细胞上的红细胞生成素受体( EPO-R)结合后,EPO-R的空间构象发生改变, 使与其结合的JAK2磷酸化激活,继而使胞浆内多种信号转导因子—STAT,MAPK, PI3K等活化,调节核内DNA 的转录和翻译,促进红系造血。临床观察发现, PV患者血清EPO水平并不增高, 甚至减低,但其外周血中红细胞绝对值却明显增多。体外培养显示,PV患者的造血干/祖细胞(HSPC)对EPO以及多种造血生长因子高度敏感。PV患者的HSPC能在不含EPO的血清培养液中继续增殖分化形成内源性红细胞集落(Endogenous Erythroid Colonies,EEC),而正常人的HSPC需要在EPO的刺激下才能形成EEC[1]。然而这种现象不是PV病人所特有的改变,其他骨髓增殖性肿瘤(MPN)—原发性血小板增多症,原发性骨髓纤维化患者中也可出现[2]。研究表明,PV者红系祖细胞的分裂速度不比正常人快,但有Bcl-2或Bcl-xl抗调亡蛋白上调,Bcl-xL表达失控,促使红系祖细胞对调亡产生抵抗,红细胞不能正常死亡而不断积聚[3]。

研究者于2004年就发现PV病人非EPO依赖性分化,JAK2和其他激酶的抑制因子在此过程中起重要作用[4],因此国内外许多研究组进一步研究导致EEC形成的潜在机制。体外培养发现,JAK2抑制剂AG490能明显减少PV患者的EEC的生成数量。应用RNA干扰技术,将JAK2基因部分缄默,出现EEC生成数量明显减少现象,且红细胞出现分化、成熟障碍,表明JAK2对EEC的形成十分重要。Levine等[5] 应用高通量基因测序方法对164例PV患者粒细胞DNA进行测序,发现了JAK2 V617F突变。进一步研究发现PV患者此突变阳性率为95%[6]。

2 JAK2蛋白及JAK2基因突变

JAK蛋白家族是由4个不同的JAK激酶组成:JAK1、JAK2、JAK3、TYK2,为非受体型即细胞内激酶,它们有高度保守性。JAK2蛋白相对分子量为13493,由1132个氨基酸构成,定位于8号染色体短臂2区4带。JAK2从N末端到C端依次由7个JAK同源区(JH1-JH7)构成。N末端JH1具有酪氨酸激酶活性,为激酶结构域;与其相邻的JH2结构域,是一个假激酶域;JH3-JH4为假性SH2区,其功能尚不十分清楚;位于C端的JH6 -JH7 为FERM区,可与多种细胞因子受体相互作用[7]。生理状态下,JH2结构域没有催化活性,但对于JH1激酶活性具有负性调控作用[8]。在缺失配体情况下,它有自动抑制功能,阻止受体磷酸化,如果这个区域的结构出现变异,其自动抑制功能将消失,完整的JH2结构域是JAK2对细胞因子反应的活性的保障。

研究者对PV患者JAK2基因进行测序后发现,JAK2基因编码序列(ATG开始)的第1849位核苷酸发生了G→T改变,翻译过程中,第617位氨基酸由原来的缬氨酸错义编码为苯丙氨酸,也就是JAK2 V617F突变。苯丙氨酸分子量较缬氨酸大,其替代缬氨酸后,HJ2三级结构出现不稳定,JH2区蛋白的正常折叠状态不能有效维持,导致JH1活化环相互接近,造成JAK2的持续活化[5-7]。

3 PV与JAK2基因突变

在生理造血过程中,无EPO存在时,EPO-R与野生型 JAK2结合,形成无活性的二聚体,胞浆内的多种信号转导因子不被活化,红系祖细胞不发生分化及增殖。如发生JAK2 V617F突变,导致细胞发生非因子依赖性生长,在低水平或无EPO存在条件下,上述信号传导也呈持续性增强,共表达转化细胞可以向红系细胞增殖分化,导致PV发生。

近些年的研究中,采用多参数流式细胞术对PV患者的造血干细胞、髓系共同祖细胞、巨核/红系祖细胞及粒/巨噬祖细胞进行分选分离后,在上述各系细胞中均可检测出JAK2 V617F突变,证实JAK2 V617F突变发生在HSC水平[9]。还有研究表明,JAK2 V617F突变可促进细胞G1/S周期加速,增殖分化能力增强[10]。此外一些研究显示,JAK2 V617f突变负荷与PV的病程长短、临床表现及预后具有相关性,另突变型和野生型JAK2的比例会对疾病表现型产生影响,严重的心血管事件更易发生于突变负荷较高的患者,针对这些患者,尽早的干预及治疗十分必要[11-13]。endprint

临床工作中,仅根据红细胞、血红蛋白水平及骨髓病理检查,将真性红细胞增多症和继发性红细胞增多症区分开并不容易,但结合JAK2 V617F突变及EPO水平,确诊并不难[14]。因此该基因突变目前已成为诊断PV的一项重要的指标,有利于该疾病的早期诊断及早期治疗,大大减少了严重并发症的发生。

4 JAK2 V617F突变靶向治疗前景

传统的治疗真性红细胞增多症的手段有减轻症状、静脉放血、放射性核素P、干扰素、抑制细胞增殖及干细胞移植等,虽然能够最大程度地减少并发症,延长生存期,但是其毒副作用仍难以克服。近年来以JAK2 V617F突变为靶点的药物研究为该疾病的治疗带来了新的希望,有望使PV患者生存期进一步延长。目前,有些JAK2抑制剂已进入临床试验阶段[15],并取得初步的结果,使PV患者JAK2基因突变的负荷减轻、临床症状改善、血栓栓塞等并发症减少[16]。不过也有研究[17]表明,JAK2 V617F突变并不是PV发病的最根本原因,部分临床确诊的PV患者未检测出JAK2 V617F突变;另外,一些研究发现,部分患者存在单克隆性造血,其在JAK2 V617F突变之前已经存在了。说明在JAK2 V617F突变可能是PV发病的中间环节,其他类型的突变在其发生之前就已经存在,与JAK2 V617F突变共同参与了PV的发病。对于JAK2 V617F突变,有许多问题尚不确切,仍需进一步深入研究。

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(收稿日期:2014-04-28)endprint