过表达转OsILP基因水稻株系的构建

孙伟清++张昌轮++袁茜++梁建生++吕冰

摘要：采用RT-PCR和TA克隆技术，从水稻品种日本晴中扩增出类整合素候选基因（integrin-like protein，ILP）OsILP的cDNA片段。经测序鉴定，克隆获得的目的片段长为1 167 bp，包含完整的CDS，编码388个氨基酸，预测分子量43 ku。进而将该片段连接至表达载体pTCK303中，通过PCR鉴定与酶切验证，结果表明成功构建了pTCK303-OsILP过表达载体。并将表达载体质粒转化为农杆菌EHA105，再通过农杆菌介导将其导入水稻日本晴的愈伤中，经遗传转化，阳性鉴定，获得了过表达转OsILP基因水稻株系。

关键词：水稻；类整合素蛋白；过表达；转基因株系

中图分类号： Q785；S336文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）10-0017-04

收稿日期：2013-11-11

基金项目：江苏省自然科学基金（编号：BK2009185）。

作者简介：孙伟清（1987—），男，山东临沂人，硕士，主要从事植物逆境生理研究。E-mail：qdswqlzc@163.com。

通信作者：吕冰，博士，副教授，主要从事植物生理生化与分子生物学研究。E-mail：lubing@yzu.edu.cn。水稻OsILP即Os03g0199100、LOC_Os03g10240，别称UPF0496 protein 1，是由1 167个核苷酸序列编码388个氨基酸组成的未知功能蛋白，预测分子量43 ku，属于DUF677家族（domain of unknown function 677）。DUFs为具有保守结构域。但在Pfam等蛋白家族数据库中信息较少、功能尚待明确的一系列蛋白家族[1]。其中，DUF677 （PF05055）家族是植物中存在的一个功能未知的蛋白家族。该家族中，除OsILP外，拟南芥AT14A也是其中之一。AT14A是一个与动物整合素蛋白具有部分相似序列和功能的膜蛋白[2-3]，被命名为类整合素蛋白（integrin like protein，ILP）。

整合素是动物细胞黏附分子的重要成员，属于一类跨膜蛋白的超家族，是由2个跨膜糖蛋白亚基（α亚基、β亚基）通过非共价键连接而成的异二聚体[4]。从结构上看，α亚基、β亚基都是由1个大的N-胞外结构域、1个短的跨膜结构域、1个短的C-胞内结构域组成[5]。……