大黄牡丹汤含药血清对LPS刺激的小鼠肺巨噬细胞TLR4和MyD88表达的影响

孙燕妮，承解静，杨晓燕，杨 洁，王丽敏，刘 军

(上海中医药大学附属普陀医院，上海200062)

脓毒症是由各种不同病原体及其毒素侵入人体引起的全身炎症反应综合征(SIRS)，重症脓毒症的病死率为28%～50%［1］。近年来，中医药对脓毒症炎症介质及其信号转导途径的作用成为重症医学的研究热点。Toll样受体4(TLR4)是G-杆菌脂多糖(LPS)的跨膜受体，目前以LPS-TLR4信号通路为靶点研究其作用的报道不多。2013年1～12月，我们观察了大黄牡丹汤含药血清(以下简称含药血清)对LPS诱导的小鼠肺巨噬细胞TLR4及髓样分化因子88(MyD88)表达的影响，探讨含药血清防治脓毒症的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 药物与试剂:大黄牡丹汤［制备方法:取大黄12 g、牡丹3 g、桃仁9 g、冬瓜仁30 g、芒硝9 g;水煎3 次，时间分别为1.5、1 h 和45 min，合并煎煮液后过滤浓缩至高浓度(含生药1.6 g/mL)、中浓度(含生药 0.8 g/mL)、低浓度(含生药 0.4 g/mL)，4℃冰箱保存］。LPS购自Sigma公司，TLR4、MyD88多克隆抗体购自Abcan公司，辣根过氧化物酶标记的Ig G购自 Santa cruz公司，Trizol和RTPCR Kit均购自大连TaKaRa生物工程公司。动物与细胞:雄性SD大鼠20只，体质量(250±20)g，由上海西普尔—必凯实验动物中心提供，经普通饲料适应性喂养1周后备用。小鼠RAW 264.7巨噬细胞株购于中科院上海细胞学生物研究所，实验时采用3～5代细胞。

1.2 实验方法

1.2.1 含药血清制备 将20只SD大鼠随机分为正常组及中药高、中、低浓度组，每组5只。中药高、中、低浓度组每天上午 9 时分别予 13.2、6.6 、3.3 g/kg的大黄牡丹汤灌胃，正常组以等量生理盐水灌胃，均连续7 d。末次灌胃(灌药前禁食不禁水12 h)2 h后心脏采血处死，离心后分离血清，合并同组含药血清，56℃水浴30 min灭活，0.22 μm 微孔滤膜除菌过滤后，-80℃保存备用。……