RP-HPLC同时测定妇炎康冲剂中5种成分的含量

白 梓 静

（宝鸡文理学院化学化工学院， 陕西 宝鸡 721013）

分析测试

RP-HPLC同时测定妇炎康冲剂中5种成分的含量

白 梓 静

（宝鸡文理学院化学化工学院， 陕西 宝鸡 721013）

建立RP-HPLC同时测定妇炎康冲剂中5种成分的含量。采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm× 250 mm, 5μm)色谱柱；以甲醇-水为流动相梯度洗脱；流速1.0 mL/min；柱温26 ℃；检测波长254 nm。隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮ⅡA、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯分别在0.506 8 ～360.2、0.291 2～208、0.257 6～184、0.548 8～392、0.344 4～246μg·mL-1范围内与峰面积呈很好的线性关系（r=1）；方法平均回收率为98.93%，100.83%，99.38%，100.2%，99.97%。本法操作简便、结果可靠，可以很好的用于妇炎康冲剂的质量控制。

妇炎康冲剂；隐丹参酮；丹参酮I；丹参酮ⅡA；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯；RP-HPLC

妇炎康冲剂主要由延胡索、败酱草、丹参、穿心莲、川楝子等11味中药组成，具有很好的清热解毒、行气止痛的功效。该药物主要用于治疗泌尿系统感染、慢性附件炎，盆腔炎以及子宫内膜炎等[1]。其中的丹参、穿心莲在中医当中有着极其广泛的应用。隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮ⅡA是丹参[2-3]中的主要有效成分，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯是穿心莲[4-5]中的主要有效成分，本文选中方中主药丹参、穿心莲作为质量控制指标，采用HPLC对这两种主药当中的5种有效成分进行测定。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

（1）Agilent 1200 高效液相色谱仪；UV mini-1240 紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；离心机（北京时代北利离心机有限公司）；超声清洗机（昆山市超声仪器有限公司）。

（2）隐丹参酮（中国药品生物制品检定所，批号：110852-200818）；丹参酮I（中国药品生物制品检定所，批号：0687-200512）；丹参酮ⅡA（中国药品生物制品检定所，批号：110867-200916）；穿心莲内酯对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110987-200507）；脱水穿心莲内酯（中国药品生物制品检定所，批号：110518-200604）；色谱甲醇；自制二次蒸馏水；妇炎康冲剂（延安市中医医院制剂室，陕药管制字[2001]第3678号）。

1.2 溶液的制备

1.2.1 对照品溶液的制备

分别精密称取丹参酮ⅡA，脱水穿心莲内酯（经五氧化二磷干燥12 h以上）以及隐丹参酮、丹参酮I、穿心莲内酯分别为18.4，24.6， 36.2，20.8，39.2 mg将其置于同一25 mL量瓶中，加色谱甲醇溶解至刻度，摇匀，备用。

1.2.2 供试品溶液的制备

精密称取4 g左右的样品，置于50 mL的量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，先超声，后离心（取适量溶液离心），时间分别为40、15 min（离心机转速为3 000 r·min-1），取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

1.2.3 阴性样品溶液

按处方配比分别称取除丹参以外的其余药味，以制备工艺制成相应的阴性样品，按项下方法操作，制成缺丹参阴性样品溶液。同法制备缺穿心莲阴性样品溶液。

1.3 色谱条件

Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流动相：水(A)—甲醇（B），梯度洗脱（0～15 min, 41% A; 15～35 min, 18% A; 35～40 min, 41% A）；流速1.0 mL·min-1；检测波长254 nm；柱温26 ℃；进样量：20 μL。对照品、样品、阴性对照品的色谱图见图1。

图1 HPLC图Fig.1 HPLC

1.4 线性关系考察

为配置成一系列浓度的对照品溶液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，首先取上述1.2.1项下混合对照品溶液I（浓度分别为：隐丹参酮1.440 8 mg·mL-1；丹参酮I0.832 mg·mL-1；丹参酮ⅡA 0.736 mg·mL-1；穿心莲内酯1.568 mg·mL-1；脱水穿心莲内酯0.984 mg·mL-1）0.5、0.7、1 mL，分别置于10 mL量瓶中，并用甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀。同时为配置成对照品混合溶液Ⅴ，需要量取对照品溶液Ⅲ 1 mL于10 mL量瓶中。将上述配置好的I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ溶液各20 μL，注入色谱仪，记录色谱图。以对照品 X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，分别得到5种有效成分的回归方程为：隐丹参酮： Y=3786.5X－7.0127，R2=0.9999（线性范围0.5068 ～360.2μg·mL-1）；丹参酮I：Y=13046X＋30.12，R2=0.9999（线性范围0.2912～208 μg·mL-1）；丹参酮ⅡA： Y=9015.7X＋26.172，R2=0.9999（线性范围0.2576～184 μg·mL-1）；穿心莲内酯： Y=4927.4X－2.0146，R2=0.9999（线性范围0.5488～392μ g·mL-1）；脱水穿心莲内酯：Y=11017X－5.9751，R2=0.9999（线性范围0.3444～246 μg·mL-1），说明线性关系良好。

1.5 稳定性试验

取同一供试品溶液，采用上述色谱条件，每隔2 h依次进样，记录色谱图及峰面积，得到峰面积的RSD分别为1.02%，1.46%，1.55%，1.30%，0.98%。

1.6 重复性试验

按照项下1.2.2，平行制备供试品溶液5份，依次进样分析，5种成分的含量平均值为0.084 15，0.012 49，0.008 26，0.160 4，0.035 17 mg·g-1，RSD分别为1.31%，1.39%，1.44%，1.17%，0.88%。

1.7 精密度试验

取对照品混合溶液，用上述色谱条件连续进样5次，RSD分别为1.02%，0.67%，0.44%，0.86%，0.76%。

1.8 回收率试验

精密称取已知含量的样品（约2 g）共5份，置具塞锥形瓶中，精密加入对照品溶液，挥干溶剂，按1.2.2项下操作，按外标峰面积法计算，结果见表1。

1.9 样品测定

取3个批次的样品，按1.2.2项下过程制备样品溶液。将每份样品分别进样5次，记录色谱图及峰面积，取平均值，计算并比较RSD，结果见表2。

表1 加标回收率试验结果Table 1 Results of recovery experiment

表2 5种成分的含量测定结果（n=5）Table 2 Results of content determination of cryptotanshinone, tanshinone Iand tanshinone ⅡA, andrographolide and dehydroandrographolide(n=5)

2 讨 论

2.1 流动相的选择

在预实验中分别选择了甲醇-0.2%的冰醋酸，甲醇-0.3%冰醋酸，甲醇-水作为流动相进样，最后根据峰形和理论塔板数，选择了甲醇-水作为系统的流动相。

2.2 超声时间的选择

在预实验中，分别选取20、40、60 min，对不同时间超声后的样品依次进行测定，结果显示，超声40 min 时测得的样品面积最大。故选择40 min作为超声时间。

2.3 离心时间的选择

样品通过离心10、15、20 min处理后，依次进样测定，结果显示15 min和20 min时的峰面积相差不大。故选择时间稍短的15 min作为离心时间。

［1］刘延红, 陈永峰, 张迎. 妇炎康冲剂的制备及其主药的定性鉴别［J］.现代医药卫生, 2007, 23(7): 1086-1087.

［2］赵鸣舒, 赵希贤. 双波长高效液相色谱法测定丹参中多种成分的含量［J］. 中国药事，2010,24（8）：804-806.

［3］姚琳, 程维明 . 采用高效液相色谱法同时测定复方丹参滴丸中的多成分含量［J］. 上海医药，2011, 32（8）：413-415.

［4］徐嵬, 杨秀伟. HPLC测定穿心莲内酯原料药的含量［J］. 中国中药杂志，2010，35(16): 2113-2115.

［5］林朝展, 邓贵华, 祝晨蔯. HPLC同时测定穿心莲药材及其制剂中的6种内酯类成分［J］. 华西药学杂志，2011, 26(1): 67-70.

RP-HPLC Simultaneous Determination of Andrographolide, Dehydroandrographolide, Cryptotanshinone, TanshinoneIand TanshinoneⅡA in Fuyankang Granules

BAI Zi-jing
（College of Chem. & Chem. Eng. Baoji University of Arts & Sciences，Shaanxi Baoji 721013，China）

A RP-HPLC method for simultaneous determination of cryptotanshinone, tanshinone Iand tanshinone ⅡA, andrographolide and dehydroandrographolide in Fuyankang granules was developed . The analysis was performed on a C18(250 mm×4.6 mm,5μm) column.The mobile phase was composed of methamol and water in gradient elution mode with at a flow rate of 1.0 ml/min.The column temperature was 26 ℃ and the UV detection wavelength was 254 nm. The results show that, the linear ranges of cryptotanshinone, tanshinone I，tanshinone ⅡA , andrographolide and dehydroandrographolide are 0.506 8 ～360.2,0.291 2～208,0.257 6～184,0.548 8～392,0.344 4～246 μg·mL-1(r=1), respectively.The average recoveries (n=5) of cryptotanshinone, tanshinone I，tanshinone ⅡA , andrographolide and dehydroandrographolide are 98.93%，100.83%，99.38%，100.2% and 99.97%, respectively. The method is convenient and accurate.It can be used for quality control in production of Fuyankang granules.

Fuyankang granules; Cryptotanshinone; TanshinoneI; Tanshinone ⅡA ; Andrographolide; Dehydroandrographolide; RP-HPLC

O 657

： A

： 1671-0460（2015）02-0426-03

2014-09-09

白梓静（1989-），女，陕西延安人，助教，硕士，研究方向：药物分析。E-mail：bzj927@126.com。