春兰基因组DNA提取方法的比较

李小玲+华智锐

摘要：为研究了春兰（Cymbidium goeringii）基因组DNA的最佳提取方法，以商洛野生春兰为试验材料，分别采用SDS法、CTAB法、高盐CTAB法提取了春兰基因组DNA。结果表明，高盐CTAB法提取效果较好，其次是CTAB法，SDS法提取效果最差。

关键词：春兰（Cymbidium goeringii）;DNA提取;浓度;纯度

中图分类号：Q943.2        文献标识码：A        文章编号：0439-8114（2014）12-2923-02

Comparative Studies on Extracting Genome DNA of Cymbidium goeringii

LI Xiao-ling，HUA Zhi-rui

（Department of Biomedical Medicine Engineering，Shangluo University，Shangluo 726000，Shaanxi，China）

Abstract： To explore the optimal genomic DNA extraction method of Cymbidium goeringii，with wild Cymbidium goeringii in Shangluo as experimental material， genomic DNA of wild Cymbidium goeringii has been extracted by the method of SDS，CTAB and high salt CTAB. The results showed that high salt CTAB was the best of three methods， followed by CTAB and SDS.

Key words： Cymbidium goeringii;DNA extraction;concentration;purity

春兰（Cymbidium goeringii）又名草兰、山兰，是国兰中栽培与观赏历史最为悠久的种类之一。目前，对春兰的研究主要集中在组织培养[1，2]、栽培[3]、非共生萌发[4]和共生菌[5，6]等方面，而对春兰分子遗传学方面的研究报道较少[1，7]。获得高质量的基因组DNA是分子遗传学研究的基础。兰科植物组织细胞中含有大量酚类、多糖等次生代谢产物，给基因组DNA的提取造成了困难。酚类物质容易氧化，氧化后与DNA形成共价结合而导致DNA褐变，引起DNA的丢失;多糖类物质容易与DNA产生沉淀，导致DNA样品的流失[8]。本研究采用SDS法、CTAB法、高盐CTAB法[1，7]提取商洛野生春兰基因组DNA，探索最适合春兰基因组DNA的提取方法，旨在为今后春兰种质资源学及其种群遗传结构研究提供依据。

1  材料与方法

1.1  材料

1.1.1  春兰的采集与预处理  试验材料采于商洛市板桥镇下弯村海拔约750 m处的林下阴坡，将采回的兰花种于花盆中并放置阴凉处备用。DNA提取前1 d，剪取健康完整的春兰幼嫩叶片，将叶片上残留的杂质用去离子水冲洗干净，用滤纸将水吸干，待室温晾干后用灭过菌的剪刀将兰花剪成碎片，用纸包好，保存于-20 ℃冰箱中备用。

1.1.2  主要试剂  三羟甲基氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）、硼酸（Boric acid）、聚乙……