心肺复苏对室颤大鼠脑线粒体功能保护作用的研究

罗燕玲 蒋龙元 符岳

心跳骤停是临床常见的急危重症，心跳骤停后心肺复苏初期自主循环恢复(ROSC)成功的患者存活率低，只有1.4%～5%能相对正常生存出院[1]。在发生心跳骤停时，心脏血供完全中断，予以高质量的CPR后，也仅能提供正常心肌血流灌注水平的10%～20%[2-3]。本实验通过电刺激致颤法建立大鼠心肺复苏模型，从线粒体水平研究全脑缺血后CPR对缺血缺氧后脑功能的保护作用。

材料与方法

一、实验材料

由中山大学实验动物中心提供(许可证号：scxk粤2004-0011)的SPF级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，体重450～550 g。

二、方法

1.动物准备与脑线粒体的分离： 应用心搏骤停和心肺复苏装置[4-5]建立大鼠心跳骤停与心肺复苏模型。 成年健康雄性SD大鼠24只，随机分为3 组，每组8只大鼠。SD大鼠术前晚禁食，予戊巴比妥钠浓度(45 mg/kg) 腹腔内麻醉，备皮，仰卧位固定，经口直视插入气管鞘管。左股动脉置入23-0 PE-50 聚乙烯管监测主动脉压，右颈静脉置3F 鞘管送入前端弯曲的指引钢丝到达右心室内膜，皮下插入针头形成回路。对照组仅行麻醉，气管插管，动静脉置管，不诱导室颤。缺血组大鼠诱发室颤15 min，不行心肺复苏(CPR)。CPR组：室颤诱发心脏骤停10 min，行5 min心肺复苏。15 min后处死各组大鼠，断颈取头，分离出海马组织。按1∶10 体积加入线粒体分离介质，匀浆10 次至无脑组织块。800 g 低温离心4 min，取上清液；再以16 000 g 低温离心15 min，弃上清，沉淀即为提取的线粒体。

2.检测指标： 采用Clark 氧电极法测定线粒体呼吸功能。反应槽内加入2．5 mL反应介质，充分搅拌使基础氧浓度达到240 nmol/mL 稳定状态，加入约2mg线粒体悬液孵育1 min，加入20 μL约4 mmol 琥珀酸二钠，测得的氧消耗率为Ⅳ态呼吸(R4)。……