基于NF-κB通路探讨疏肝健脾含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞、Kup ffer细胞炎症损伤保护作用机制研究

韩 莉， 龚享文， 杨钦河*， 闫海震， 张玉佩， 李媛媛， 徐拥建， 张金文，林春梅

（1.暨南大学附属第一医院，广东广州510632；2.暨南大学医学院，广东广州510632）

基于NF-κB通路探讨疏肝健脾含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞、Kup ffer细胞炎症损伤保护作用机制研究

韩 莉1， 龚享文2， 杨钦河2*， 闫海震2， 张玉佩2， 李媛媛2， 徐拥建2， 张金文2，林春梅2

（1.暨南大学附属第一医院，广东广州510632；2.暨南大学医学院，广东广州510632）

目的基于核转录因子kappaB（nuclear transcription factor-kappaB，NF-κB）信号通路探讨脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞炎症损伤以及疏肝健脾含药血清的保护作用。方法通过体外培养以及免疫荧光鉴定SD大鼠肝细胞及Kupffer细胞，利用LPS刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞产生炎症反应，酶联免疫法检测肝细胞及Kupffer细胞培养上清液中白介素-1（interleukin-1，IL-1）、人血清淀粉样蛋白（seruMamyloid A，SSA）的表达，Western blot法检测大鼠肝细胞及Kupffer细胞NF-κB通路相关蛋白的表达。结果每只大鼠通过纯化后获得肝细胞数量1.5×108～2.0×108个，Kupffer细胞数量0.5×107～1.0×107个，Typan blue染色测定肝细胞及Kupffer细胞活力均可达到95%以上。LPS组肝细胞及Kupffer细胞较空白血清组IL-1、SSA水平均有显著升高 （P＜0.01）。而与LPS组比较，药物干预组可显著降低 （P＜0.01）。肝细胞、Kupffer细胞的蛋白表明，与空白血清组比较，LPS组肝细胞及Kupffer细胞NF-κB、IκB及磷酸化IKKβ蛋白表达均有显著升高（P＜0.01）；与LPS组比较，疏肝健脾方药含药血清能显著下调肝细胞IκB及p-IKKβ蛋白的蛋白表达水平（P＜0.01），但NF-κB蛋白表达水平无显著差异（P＞0.05），疏肝健脾含药血清能下调Kupffer细胞NF-κB、IκB及p-IKKβ蛋白表达（P＜0.01）。结论疏肝健脾含药血清能够对LPS刺激大鼠肝细胞、Kupffer细胞炎症损伤产生保护作用，其机制可能与NF-κB信号通路相关。……