化痰活血益心方对大鼠压力负荷性心肌肥厚氧化应激的影响

覃裕旺，朱智德，王庆高，卢健棋，王振常，凌 芸

（1.广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530023；2.广西中医药大学护理学院，广西 南宁 530023）

心肌肥厚是继发于心脏压力负荷增加后的适应性反应，是多种心血管疾病的并发症，是心脏疾病的恶化因素［1］。大量的资料证实氧化应激与心肌肥厚的形成密切相关，氧化应激引起大分子（主要为脂质、蛋白质和DNA）的氧化损伤，这些损伤是导致衰老、退行性疾病、心血管疾病和肿瘤形成的基础［2］。笔者采用部分缩窄腹主动脉方法制作大鼠心肌肥厚模型，观察化痰活血益心方对大鼠心脏重量指数、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、血清脂联素（APN）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量的影响，拟从氧化应激的角度阐明化痰活血益心方防治心肌肥厚的机理。

1 实验材料

1.1 动物 选用清洁级Wistar大鼠，雌雄各半，体重220～250 g，由广西医科大学医学实验动物中心提供，合格证号：SCXK桂2003-0003。

1.2 药物 化痰活血益心方（由陈皮15 g，法半夏10 g，茯苓15 g，党参 30 g，生姜 6 g，丹参 10 g，川芎 10 g，桂枝 10 g，砂仁6 g，炙甘草10 g等组成），由广西中医药大学第一附属医院药房提供，经干燥、称重、浸泡、煎煮3次，浓缩留存。

1.3 试剂 MDA、SOD、GSH-Px试剂盒购自南京建成生物工程研究所；血清脂联素（APN）试剂盒购自R＆D公司。

2 方 法

2.1 大鼠心肌肥厚造模方法 采用部分缩窄腹主动脉方法造模［3］。以30 mg/kg的戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉，将大鼠仰卧位固定于鼠板，剪去术野皮毛，皮肤消毒后行腹正中切口，切开皮肤及肌层，暴露内脏，将大鼠胃及其肠系膜等推向右侧，暴露肾脏及脊柱前的腹主动脉，在肾动脉分支上方分离腹主动脉约1 cm长，用7号注射器针头紧贴腹主动脉，平行放置，并将两者一起结扎，然后抽出注射器针头，即可部分缩窄腹主动脉。术后每天用青霉素（5万单位/只）腹腔注射，连续7 d。3～4 d大鼠心肌即开始肥厚，2～3周达稳定高峰。

2.2 分组及给药 取Wistar大鼠50只进行造模，另取10只大鼠为空白组。造模大鼠随机分为5组：模型对照组，中药组（大、中及常规剂量组），卡托普利组，每组10只。空白组：正常饲养。模型对照组：造模2周后灌胃等量生理盐水，每日灌胃1次，共4周。中药常规剂量组：造模2周后给予化痰活血益气方，灌胃量换算按《药理实验方法学》［3］计算，每100 g大鼠每日给药量为12 mg，每日灌胃1次，共4周。中药中剂量组：造模2周后给予化痰活血益气方，给予5倍常规剂量，每日灌胃1次，共4周。中药大剂量组：造模2周后给予化痰活血益气方，给予10倍常规剂量，每日灌胃1次，共4周。卡托普利组：造模2周后给予卡托普利，每100 g大鼠每日给药量为0.675 mg，每日灌胃1次，共4周。

2.3 观察指标及检测方法

2.3.1 心脏重量指数检测 测定全心重量指数（HW/BW）、左心室重量指数（LVW/BW，即LVI）。末次给药后禁食12 h，大鼠称体重后处死，取出心脏，去除大血管、心外膜脂肪组织，用生理盐水清洗，吸干后称全心重量（HW）；剪除心房和右心室，称左心室重量（LVW）。计算心重指数（全心重量/体重，HW/BW）和左心室重量指数（左心室重量/体重，LVW/BW，即LVI）。

2.3.2 MDA，SOD，GSH-Px，APN检测 大鼠股动脉取血，静置，4℃2 000 r/min离心15 min，分离血清，按照试剂盒说明用硫代巴比妥酸（TBA）微量法测定血清丙二醛（MDA）含量；用黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶（SOD）活性；血清脂联素（APN）采用ELISA测定；谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）采用二硫代二硝基苯甲酸法检测。

2.4 统计学处理 采用四川大学华西医学院PEMS3.1统计软件进行统计。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，以P＜0.05为有显著性差异。

3 结 果

3.1 两组心脏指数比较 见表1。与空白组比较，模型对照组全心重量指数、左心室重量指数均显著升高（P＜0.01）；与模型对照组比较，中药大、中、常规剂量组及卡托普利组均能显著降低压力负荷性大鼠全心重量指数、左心室重量指数（P＜0.01或P＜0.05）；卡托普利组与中药大、中、常规剂量组比较，差异无显著性意义（P ＞0.05）。

表1 两组心脏指数比较 （g/kg，±s）

表1 两组心脏指数比较 （g/kg，±s）

注：与模型对照组比较，①P＜0.01，②P＜0.05

组 别 n HW/BW LVW/BW空白组 10 2.09±1.51① 2.02±0.38①模型对照组 10 6.77±1.95 4.95±1.21卡托普利组 10 4.81±2.09② 3.62±1.07②中药常规剂量组 10 4.39±1.36② 3.37±1.45②中药中剂量组 10 3.87±2.40① 2.77±1.04①中药大剂量组 10 3.55±1.97① 2.53±1.72①

3.2 两组MDA，SOD，GSH-Px，APN比较 见表2。与模型对照组比较，卡托普利组及中药大、中、常规剂量组均能显著降低 MDA，升高 SOD，GSH-Px，APN（P ＜0.01）。与卡托普利组、中药常规剂量组比较，中药大、中剂量组降低MDA及升高SOD，APN差异有显著性意义（P＜0.01或P＜0.05）。中药常规剂量组与卡托普利组在降低MDA，升高SOD，GSH-Px，APN方面差异无显著性意义（P＞0.05）。

4 讨 论

氧化应激参与了心肌肥厚的发生、发展过程［2］。生理情况下，机体氧自由基产生与细胞内抗氧化防御系统能维持一个动态平衡。心肌肥大时，心肌内单位横截面上毛细血管密度降低，毛细血管之间距离增加，线粒体与胶原比值下降，线粒体溶解，造成心肌能量供应相对不足，加重心肌缺血缺氧，氧自由基生成增加和清除减少。同时，氧自由基可激活基质金属蛋白酶，分解胶原蛋白，从而破坏正常的细胞外环境，导致各种生长因子的表达，引起心肌胶原重建，间质重塑，从而促进心肌肥厚［1］。

SOD能清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受氧自由基损伤，MDA含量可反映脂质过氧化程度，间接反映细胞损伤。GSH-Px是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶，可特异性催化还原型谷胱甘肽（GSH）对过氧化氢的还原反应，对于终止自由基引起的脂质过氧化反应具有极其重要的意义［4］，可起到保护细胞膜结构和功能完整的作用［5］。赵沛光［6］研究显示SOD与GSH-Px水平呈正相关（r=0.6019，P＜0.01），SOD降低可导致过氧化脂质的堆积，抗氧化能力的减弱，造成GSH-Px活性下降。APN是脂肪细胞分泌的一种特异性血清蛋白，脂联素可通过调节血管细胞中NADPH氧化酶的某些亚单位或它的蛋白亚单位的活性，抑制过氧化物的形成［7］。杨玉红等［8］研究显示APN与MDA水平呈明显负相关（r=-0.436，P＜0.01），血清APN与SOD水平呈明显正相关（r=0.451，P＜0.01），认为糖尿病微血管病变患者血清脂联素水平降低可能是导致患者体内过氧化损伤的重要原因。郭小妹等［9］研究显示急性脑梗死患者血清APN，SOD水平降低与MDA的脂质过氧化有关。

表 2 两组 MDA，SOD，GSH-Px，APN 比较 （±s）

表 2 两组 MDA，SOD，GSH-Px，APN 比较 （±s）

注：与模型对照组比较，①P＜0.01；与空白组比较，②P＜0.05，③P ＜0.01；与卡托普利组比较，④P＜0.05，⑤P＜0.01；与中药常规剂量组比较，⑥P＜0.05，⑦P＜0.01

组 别 n MDA（nmol/L） SOD（U/ml） GSH-Px（U/ml） APN（μg/ml）空白组 10 14.70±5.35① 139.27±21.01① 220.10±30.94① 14.29±3.81①模型对照组 10 36.59±7.22 105.42±17.92 172.08±38.17 8.07±2.58卡托普利组 10 15.38±8.06①② 174.17±20.17①③ 273.44±23.78①③ 13.10±2.88①中药常规剂量组 10 21.77±6.53①③ 166.05±15.58①③ 259.17±32.20①② 12.52±3.77①中药中剂量组 10 16.02±5.05①④⑥ 204.98±24.65①③⑤⑦ 302.45±37.42①③⑥ 17.80±2.04①②⑤⑦中药大剂量组 10 18.21±7.72①⑤⑦ 194.43±30.15①③④⑥ 311.02±33.09①③④⑦ 18.02±3.62①②⑤⑦

本研究结果显示，与模型对照组比较，中药大、中、常规剂量组及卡托普利组均能显著降低压力负荷性大鼠全心重量指数、左心室重量指数（P＜0.01或P＜0.05），卡托普利组与中药大、中、常规剂量组比较差异无显著性意义（P＞0.05），说明化痰活血益心方具有抗心肌肥厚的作用。与空白组比较，模型对照组SOD，APN，GSH-Px水平降低，MDA升高，说明心肌肥厚与SOD，APN，GSH-Px水平降低及MDA的脂质过氧化有关，与文献报道相似［8-9］。与模型对照组比较，卡托普利组及中药大、中、常规剂量组均能显著降低MDA，升高SOD，GSHPx，APN（P＜0.01），说明化痰活血益心方能升高SOD，GSHPx，APN及降低MDA，从而发挥抗氧化应激损伤作用，这可能是化痰活血益心方抗心肌肥厚的机制。且化痰活血益心方抗氧化应激损伤与剂量有一定关系，化痰活血益心方大、中剂量升高SOD，GSH-Px，APN及降低MDA较常规剂量组差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01），其机制有待进一步研究。

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