NOS在侧支血管生长中对血管VE-cadherin表达及通透性的影响

杨 光，金春子*（吉林省延边大学附属医院，吉林 延边 133000）



NOS在侧支血管生长中对血管VE-cadherin表达及通透性的影响

杨 光，金春子*
（吉林省延边大学附属医院，吉林 延边 133000）

【摘要】目的 探究氧化氮合酶（NOS）在侧支血管生长中对血管VE-cadherin表达及通透性的影响。方法 选取40只成年SD（Sprague-Dawley）大鼠作为研究对象，采用随机数字表法分为正常组及研究组（股动脉结扎并腹腔注射NOS）各20只。采用苏木素-伊红染色法、伊文思蓝通透性实验观察两组大鼠侧支血管生长中血管VE-cadherin表达及通透性变化情况。结果 研究组大鼠实施股动脉结扎诱导侧支血管生长并腹腔注射NOS存活1周后，其血管VE-cadherin表达（190.2±22.8），与正常组（169.5±15.5）相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；VE-cadherin通透性指标上，研究组伊文思蓝渗出量（37.5±5.8）ng/mg，与正常组（80.5±11.0）ng/mg相比较，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 NOS能够显著提高血管VE-cadherin表达，从而降低血管通透性以及阻断侧支血管炎症的形成与发展，对血管疾病的治疗具有重要应用价值，值得在临床中推广使用。

【关键词】侧支血管；血管内皮钙粘蛋白；伊文思蓝；通透性

如何降低血管通透性以及阻断侧支血管炎症的形成与发展成为当前国内外医学界关注的焦点问题。为此，本次研究针对NOS在侧支血管生长中对血管VE-cadherin表达及通透性的影响展开深入分析，现将结果报道如下。

1　资料与方法

1.1 一般资料

选取40只成年SD（Sprague-Dawley）大鼠作为研究对象，其中雄性22只，雌性18只，体重220～250 g，平均体重（235±10）g，均为某医学院实验动物学部自行培育繁殖的健康SD鼠。

1.2 方法

临床研究人员采用随机数字表法分为正常组及研究组（股动脉结扎并腹腔注射NOS），各20只。研究组股动脉结扎并腹腔注射NOS步骤如下。研究用大鼠经过适应性观察后采用15%水合氯酸溶液实施腹腔麻醉，其使用剂量标准为300 mg/kg。取仰卧位并将其四肢充分固定之后暴露腹部皮肤并络合碘消毒，在其腹腔部位与腿部交汇之处腹股沟韧带下方部位逐层分离皮肤组织，分离出股动脉后切断其余小分支并使用医用棉线实施双结扎，并向其结扎后的股动脉注入NOS抑制剂。之后使用生理盐水进行细致消毒后逐层关闭创口。将所有实验用大鼠放置在25℃环境中培养1周后选取培养部位生理切片放入4%多聚甲醛溶液固定15 min，随后放入0.5%伊红染液予以染色90 s后平放于室温条件下自然风干，之后采用高倍光学显微镜观察组织形态变化情况并做相应记录。随后进行伊文思蓝（Evanceblue，EB）通透性实验，首先配置伊文思蓝溶液，将2%伊文思蓝（美国Sigma-Aldrich公司生产）50 mg溶解于10 mL生理盐水并经超声波振荡溶解。其次，打开实验用大鼠胸腔，从其左心室-升主动脉将50 mL生理盐水注入，当无残余血液流出后依次切开皮肤组织并取出侧支血管及其附近组织放入样本管。第三，定量检测。使用甲酰胺将对2%伊文思蓝进行稀释，浓度以20 ng/μL为宜。随后制作伊文思蓝标准曲线，将经过稀释的伊文思蓝溶液对半稀释成为10 ng/μ、5 ng/μ、2.5 ng/μ、1.25 ng/μ等几个标准值。将制备好的样本在60℃孵育箱中培养24 h，以10000 r/min离心30 min后去除上清液后详细记录分光光度计620 nm处的吸光值并根据已经绘制的标准曲线计算其通透性[1]。

1.3 统计学方法

本次研究当中的所有数据均采用SPSS 17.0统计软件进行处理，计量资料以“x ±s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结 果

2.1 NOS在侧支血管生长中对血管VE-cadherin表达的影响

研究组大鼠实施股动脉结扎诱导侧支血管生长并腹腔注射NOS存活1周后，其血管VE-cadherin表达（190.2±22.8），与正常组（169.5±15.5）相比较，差异有统计学意义（t=8.581，P＜0.05）。

2.2 NOS在侧支血管生长中对血管VE-cadherin通透性的影响

VE-cadherin通透性指标上，研究组伊文思蓝渗出量（37.5±5.8）ng/mg，与正常组（80.5±11.0）ng/mg相比较，组间差异有统计学意义（t=9.589，P＜0.05）。

3　讨 论

根据当前临床研究证实，血管内皮细胞之间存在三种连接形式。分别是粘附连接、紧密连接、缝隙连接[3]。在上述三种连接相互作用配合之下，维持了机体内部血管的完整性。而在此其中VE-cadherin利用自身的细胞外结构域与分布在周围的其他VE-cadherin紧密连接，从而形成同型型粘附关系，之后连接至β-catenin，或者有目的性的与plakoglobin（斑珠蛋白）、α-catenin等相连接，构成了血管壁所具有的屏障功能[3]。目前临床中常见的血管疾病通常是由于主动脉血管腔径变窄或者在局部区域形成阻塞，继而导致血管破裂，从而引发的一系列疾病。通过进一步深入研究发现，患有血管疾病的患者自身主动脉发生阻塞之后常常会发生侧支血管疯狂生长现象，尽管该现象在一定程度上能够提高血氧的输送量，但是，侧支血管通透性的大幅提升，同时也会导致血管炎症随之转移，并朝着深处进一步发展。此外，由于此种情形可以降低VE-cadherin表达，继而严重破坏血管壁组织结构，造成不可逆性通透性增加，加重病情[4]。所以，针对侧支血管生长实施干预成为当前控制血管疾病进展的关键。

本次研究中研究组大鼠实施股动脉结扎诱导侧支血管生长并腹腔注射NOS存活1周后，其血管VE-cadherin表达（190.2±22.8）明显高于正常组（169.5±15.5），并且在VE-cadherin通透性指标上，研究组伊文思蓝渗出量（37.5±5.8）ng/mg显著低于正常组的（80.5±11.0）ng/mg，结果表明NOS能够显著提高血管VE-cadherin表达，从而降低血管通透性以及阻断侧支血管炎症的形成与发展，对血管疾病的治疗具有重要应用价值，值得在临床中推广使用。

参考文献

[1]余 涛,刘曼曼,李 丹,等.去甲斑蝥素对人脐静脉内皮细胞迁移、黏附、管腔形成能力及血管内皮生长因子受体、内皮细胞钙黏着蛋白表达的影响[J].中国癌症杂志,2012,03:232-235.

[2]杨宝林,伍校琼,罗明英,等.L-NAME对人脐静脉内皮细胞VE-cadherin表达的影响[J].中国临床解剖学杂志,2012,04:412-416.

[3]徐洪增,金元哲.1-磷酸鞘氨醇受体激动剂对血管衰老的保护作用[J].中华老年心脑血管病杂志,2014,09:995-997.

[4]徐秀连,王崇树.Maspin、iNOS及VEGF与胃癌关系的研究现状[J].肿瘤预防与治疗,2013,02:107-111.

［基金项目］国家自然科学基金（81460039）；吉林省科技厅青年科研基金（20140520024JH）；吉林省卫生厅青年科研基金（2014Q043）

［通讯作者］金春子,(1984-)女，吉林延吉人，医学博士，主治医师，研究方向:高血压

【文章编号】ISSN.2095-6681.2015.04.185.02

【文献标识码】B

【中图分类号】R543