不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用

【摘要】目的　研究分析免疫组化染色使用不同抗原修复的使用情况。方法 选取66例我院乳腺癌手术切除组织来进行分析，采取不处理、电炉煮沸、高压、胰酶法等抗原修复方式进行免疫组化染色，探讨免疫组化染色在不同方式下的情况。结果　抗原修复选择的方法不同，组织抗原暴露就会有差异性，高压加热能够让掩盖以及交联变性的抗原暴露和修复，提升免疫组化结果的准确度，选择高压热修复方式获得阳性结果比较可靠。结论 临床中根据情况来使用不同的抗原修复方式能够对免疫组化结果进行优化，对难以检测的细胞内液和细胞核提供较高的检出率，结果可靠性较高。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.14.145

作者单位：163316 黑龙江省大庆市第四医院

Application of Different Antigen Retrieval Methods in Immunohistochemical Staining

JU Xueping The Fourth Hospital of Daqing City，Daqing 163316，China

【Abstract】Objective To study immunohistochemical analysis using a different antigen retrieval. Methods A total of 66 cases of breast cancer in our hospital surgical removal of tissue for analysis，take no treatment，electric boiling，pressure，and other aunt enzymatic antigen retrieval mode immunohistochemical staining. Immunohistochemical staining situation in different ways were discussed. Results The repair method selected different antigens，tissue antigen exposure had differences，autoclavable allow conceal and crosslinked denatured antigen exposure and repair，improve accuracy of immunohistochemistry results，the highpressure hot fix more reliable way to get a positive result. Conclusion According to the clinical situation，the use of different antigens repair methods for immunohistochemical results can be optimized，for difficult and nuclear provide higher detection rate in the intracellular fluid and test cell，the results higher reliability.

【Key word】 Antigen retrieval method，Immunohistochemistry，Microwave，Electric boiling，Trypsin method

免疫组织化学是使用抗体和抗原特异性结合进行细胞以及组织某些化学物的鉴定方式，该技术既包含了免疫学理论，同时也包含了组织化学理论 ［1］。免疫组织化学染色技术的敏感性强，特异性高，对组织、细胞以及细胞培养爬片都能够进行蛋白质和多肽定位，一般临床中使用的方式有化学方式以及物理方式两种，使用较多的技术包括了酶消化、微波、高压锅煮沸、蒸汽等等。此次我院对三种使用比较多的抗原修复方法进行了研究，探讨其免疫组化染色情况，现根据研究进行以下报道。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　组织材料　根据我院2013年1月～2014年9月接收的66例乳腺癌外科手术切除组织来进行探讨分析，使用了5种常用的抗体修复方式进行比较。

1.1.2　试剂　（1）16种抗体、s-p即用型试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司；（2）胰蛋白酶也购自福州迈新生物技术开发公司即胰酶消化试剂盒；（3）抗原修复缓冲液：柠檬酸盐缓冲液（0.01 mmol，pH=6.0）edta缓冲液（1 mmol，pH=8.0）按1：50的比例稀释；（4）丙酮、苯甲酸甲酯、二甲苯、10%福尔马林液、3%双氧水甲醇液、PBS（pH=7.2～7.4）液、dab显色液等。

1.2　方法

1.2.1　电炉加热抗原修复法　（1）切片脱蜡至水。（2）0.3% H 2O 2甲醇处理切片10 min。（3）自来水洗，蒸馏水洗。（4）使用电炉和抗原修复液对切片进行处理，等温度到达92℃后可以拔掉电源，等温度低于92℃时将电源插上，保持在这个范围内，持续进行切片处理10 min。（5）等修复液的温度回复到室温状态后，PBS洗三次，根据选择的染色方法来染色。

1.2.2　高压抗原修复法　（1）切片脱蜡至水。（2）0.3% H 2O 2甲醇处理切片10 min。（3）自来水洗，蒸馏水洗。（4）置切片于修复液中，连容器一同置入高压锅进行煮沸。等压力阀喷气1～4 min。（5）等修复液温度回复到室温，PBS洗三次，按选择染色方式染色。

1.2.3　真空负压抗原修复法　（1）切片脱蜡至水。（2）0.3% H 2O 2甲醇真空负压处理5 min。（3）自来水洗，蒸馏水洗。（4）0.01 M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0），真空负压干燥箱预先调至95℃，真空负压处理10 min。（5）待修复液降至室温后，PBS洗3次，随后按选好的免疫组化染色方法进行染色。

2　结果

此次研究中使用的三种抗原修复方式结果表明，高压锅加热抗原修复法处理过的切片组织，使用的免疫组化染色结果阳性表达比较优秀，颗粒和颜色都很清晰，电炉煮沸抗原修复方式中阳性表达抗体只有一种。

3　讨论

免疫组化的原理是基于抗原和抗体的反应来实现的，使用显色剂来对反应抗体进行标记，就能够对组织细胞抗原进行确定，达到定位、定性、定量的目的。抗原和抗体的结合特异性是比较高的，抗原修复的有效温度以及需要的时间根据使用的设备以及仪器变化会有一定的差异性，修复抗原时选择的温度范围以及保持有效温度的时间也有差异性 ［2］。抗原修复我们选择加热的方式比较多，微波辐射加热的方式虽然产生的热量快，但是液体干涸也快，所以，要求使用足够的修复液，否则就会导致切片干涸。实验室研究表明微波辐射对修复液的要求有时会达到1 000 ml ［3］。使用大量的修复液需要的沸腾时间也会增加，那么切片的辐射量也会增加，这样才能够彻底的让抗原得到修复。

总而言之，抗原修复方法应用于免疫组化染色时，需要选择正确的抗原修复方式，这样才能够让染色的效果提升，获得的阳性结果也更加准确，此次研究中我们选择的三种修复方式中，高压锅加热的方式获得的阳性颗粒表达比较优秀，电炉煮沸的阳性表达抗体为一种。