荧光光度法在临床检验中的应用

王宇 靳伟东 刘天尧 兰凯

荧光光度法在临床检验中的应用

王宇 靳伟东 刘天尧 兰凯

目的探究荧光光度法在临床检验中的应用价值。方法以铽离子—沙星类药物作为荧光探针，分析荧光光度法在血清中胆汁酸检测中的应用情况。结果金属离子等共存物质在与人体内浓度相近时，胆汁酸与铽—环丙沙星体系的相互作用并不明显，采用荧光探针方法测定胆汁酸，可用于测定血清中胆汁酸含量。结论以铽离子—沙星类药物作为荧光探针测量血清中胆汁酸具有可行性。

临床检验；荧光光度法；荧光探针

临床检验是临床医学的重要组成部分，也是临床生物化学的重要研究领域，随着现代医学的快速发展以及卫生保健水平的提高，对临床检验提出了更高的要求，目前临床检验常用的方法包括色谱分析法、光度分析法等，其中光度分析法具有准确度高、分析速度快、选择性好等诸多优点，在临床应用较为广泛，尤其是荧光光度法，灵敏度较高，现已成为各种制剂中药物分析的常用方法，如抗生素、抗疟药、止痛药、麻醉药等，其在临床检验中发挥着越来越重要的作用[1]。本研究以铽离子—沙星类药物作为荧光探针，分析荧光光度法在胆汁酸测定中的应用情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 实验资料

所用仪器包括F380型荧光分光光度计（由天津港东科技发展股份有限公司生产）和SevenExcellence酸度计（由梅特勒—托利多国际股份有效公司生产），试剂有胆酸储备液、诺氟沙星储备液、环丙沙星储备液、Tb3+储备液等，储备液和工作液均置于生化培养箱内保存，控制温度为0～4℃。

1.2 实验方法

将诺氟沙星储备液和Tb3+储备液依次置于比色管中，蒸馏水稀释定容，测定荧光光谱及强度，实验条件为：NF=1.1×10-6mol/L，Tb3+=7.5×10-5mol/L，pH=9.0，BA=1.0×10-6mol/L，明确酸度、铽离子、反应时间、加入顺序、共存物质对荧光强度的影响，对实验条件进行优化，线性范围为5.0×10-7～2.0×10-6mol/L，荧光强度与BA浓度成正比，确立BA测定方法，以血清胆汁酸测定肝功能具有可行性。将环丙沙星储备液和Tb3+储备液依次置于比色管中，蒸馏水稀释定容，振荡后静止10 min，测定荧光光谱及强度，实验条件为：CIP=7.6×10-7mol/L，Tb3+=5.0×10-5mol/L，pH=9.2，BA=1.0×10-6mol/L，分析胆汁酸与铽—环丙沙星体系的相互作用。

2 结果

2.1 相互作用关系分析

当pH值为9.2时，铽—环丙沙星体系的荧光强度F值达到最大，此时缓冲溶液加入量为1.5 ml，反应时间为10 min，试剂加入顺序依次为CIP、Tb3+、pH、BA；当Tb3+浓度体积在8.0×10-5～1.0×10-4mol/L时，荧光强度达到最大并保持稳定，此时溶液体积在1.6～2.0 ml范围内，以1.8 ml为准，CIP与Tb3+配比为1：118。测定结果显示，Zn2+（Cl-）浓度为1.2×10-4mol/L，荧光强度为-1.14%；Ca2+（Cl-）浓度为1.0×10-4mol/L，荧光强度为-3.44%；Fe3+（SO42-）浓度为8.9×10-8mol/L，荧光强度为-5.35%；Mg3+（SO42-）浓度为5.0×10-4mol/L，荧光强度为-0.92%；鸟嘌呤浓度为8.0×10-9mol/L，荧光强度为-8.73；L-组氨酸浓度为1.0×10-4mol/L，荧光强度为-5.84%；葡萄糖浓度为1.0×10-3mol/L，荧光强度为-1.39%。可见金属离子等共存物质在与人体内浓度相近时，相互之间不会产生影响。

2.2 临床检验应用分析

优化实验条件后，采用荧光探针方法测定胆汁酸，其检测限较低，浓度参考值4.8×10-4～4.8×10-3mol/L；取0.4 ml血清置于试管中，加入Al2O3和异丙醇，剂量分别为2.0 g、12.0 ml，在60℃水浴中加热，超声振荡，时间分别为2 min、10 min，取上层离心，转速为4 000 转/min，时间为min，置于试管备用，求得血清中胆汁酸浓度，其中血清1样品含量和胆汁段平均值分别为2.26×10-6mol/L、6.13×10-6mol/L，回收率为97.1%，血清浓度为6.74×10-4mol/L；血清2样品含量和胆汁段平均值分别为2.10×10-6mol/L、6.03×10-6mol/L，回收率为98.3%，血清浓度为6.24×10-4mol/L；血清3样品含量和胆汁段平均值分别为1.73×10-6mol/L、5.65×10-6mol/L，回收率为98.0%，血清浓度为5.18×10-4mol/L。

3 讨论

荧光光度分析法是临床检验中较为先进的一种手段，具有高灵敏度、宽线性范围等优势，在临床检验中的应用十分广泛，相关报道统计结果显示，荧光光度分析法现多用于氨芐青霉素、氟罗沙星、甲硝唑、醋酸泼尼松龙、醋酸甲地孕酮、诺氟沙星、氧氟沙星、依诺沙星等药物测定中，可获得pH值、线性范围及检测限，测定样品以药物制剂为主，并拓展到血清中药物含量的测定中，随着荧光分析技术的不断进步，临床检验可供选择的荧光光度法也越来越多，如同步荧光法、荧光探针法、荧光免疫分析法、光化学荧光法等，这些新方法在临床检验中应用取得的结果较为满意[2-3]。以第三代喹诺酮药物和荧光探针为例，诺氟沙星和环丙沙星的抗菌谱广，是铽离子的理想配体；因某些金属离子具有荧光特性，将其作为荧光探针置换生命金属离子与生物分子配位体相结合，通过测定荧光基本参数，可获得与生物大分子相关的一些信息[4]。

胆汁酸是胆汁的主要成分，其代谢以肝脏为中心，涉及到胆道系统等途径，肝胆疾病患者体内血清胆汁酸浓度会发生明显变化，胆汁酸含量的测定对肝胆疾病的诊断具有重要的临床意义[5]。本次实验中，以铽离子—沙星类药物作为荧光探针，对实验条件进行优化，分析荧光光度法在血清中胆汁酸检测中的应用情况，结果显示，金属离子等共存物质在与人体内浓度相近时，胆汁酸与铽—环丙沙星体系的相互作用并不明显，采用荧光探针方法测定胆汁酸，其检测限较低，可用于测定血清中胆汁酸含量，其浓度在正常参考值范围内，证实以铽离子—沙星类药物作为荧光探针测量血清中胆汁酸具有可行性，

综上所述，荧光探针可成功用于血清中胆汁酸的测定，是一种很有发展前景的肝功能试验，在一定程度上反映了荧光光度分析法在临床检验中的应用价值，至于该方法在其他方面的应用还有待进一步研究。

[1]王美丹，高燕，赵渤年. 荧光分析法在药学研究中的应用进展[J].食品与药品，2013，15（1）：61-64.

[2]陆明，范国荣，汪杨，等. 测量不确定度在药品检测领域的研究进展[J]. 中国药事，2013，27（5）：485-492.

[3]高霞，周凌云，席景砖. 荧光分析法在环境有机污染物检测中的应用[J]. 光谱实验室，2011（4）：2008-2016.

[4]吴晓红，李小华. 荧光光度法在食品检测中的应用[J]. 食品工业，2012，33（12）：172-175.

[5]徐静，孙兴权，韩慧，等. 荧光法在食品理化检验标准中的应用进展[J]. 食品安全质量检测学报，2015（1）：17-24.

Application of Fluorescence Spectrophotometry in Clinical Examination

WANG Yu JIN Weidong LIU Tianyao LAN Kai, Heilongjiang Provincial Prison Administration Center Hospital, Harbin 150080, China

ObjectiveTo explore the application value of fluorescence spectrophotometry in clinical examination.MethodsWith terbium foxacin as fuorescent probe, analysis on Application of fuorescence method in the detection of serum bile acid.ResultsMetal ions coexisting substances in and are close to the concentration of human body and the interaction of bile acid with terbium ciprofoxacin system is not obvious, determination of bile acids by fluorescence probe technique can be used for the determination of bile acids in serum.ConclusionWith terbium foxacin as fuorescence probe in the measurement of serum bile acids is feasible.

Clinical test, Fluorescence spectrometry, Fluorescence probe

R446.1

A

1674-9308（2015）32-0037-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.32.027

150080哈尔滨，黑龙江省监狱管理局中心医院