百令胶囊对肾移植大鼠肾功能及排斥反应的影响

左 霞，郭俐宏，李 莉

(1. 湖北省十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)，湖北 十堰 442000;2. 湖北医药学院,湖北 十堰 442000)

百令胶囊对肾移植大鼠肾功能及排斥反应的影响

左 霞1，郭俐宏1，李 莉2

(1. 湖北省十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)，湖北 十堰 442000;2. 湖北医药学院,湖北 十堰 442000)

目的 观察百令胶囊对左肾移植大鼠肾功能及排斥反应的影响。方法 将80只大鼠随机分为假手术组、模型组、环孢菌素A组、百令胶囊组，每组20只。除假手术组外,其余3组均进行同种异体左肾移植术。术后百令胶囊组给予百令胶囊20 mg/kg灌胃并腹腔注射环孢菌素A 2.0 mg/(kg·d)，环孢菌素A组注射环孢菌素A 2.0 mg/(kg·d),假手术组及模型组仅灌等体积生理盐水，1次/d,均连续灌胃3周。测定治疗前后4组大鼠血清胱抑素C(Cys C)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、内源性超氧化物歧化酶(SOD)、免疫球蛋白G(IgG) 、全血T 淋巴细胞、单核细胞数量，并统计大鼠存活时间及存活率。结果 百令胶囊组血清Cys C、BUN、Cr、MDA、LDH水平及T 淋巴细胞、单核细胞数量均明显降低，血清SOD、IgG水平升高，大鼠存活时间及存活率明显提高，与模型组及环孢菌素A组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 百令胶囊可明显抑制脂质过氧化反应，提高SOD活性，清除肾移植术后MDA，提高免疫功能,可增强环孢菌素A抗排异反应药效，促进肾功能恢复，提高大鼠存活时间及存活率，对移植肾有一定的保护作用。

大鼠; 百令胶囊；肾移植；免疫调节；肾功能

冬虫夏草为生长在西藏高海拔地区的独特物种，为麦角菌科真菌寄生在蝙蝠娥科昆虫幼虫的子座及幼虫尸体的复合体。《本草从新》记载冬虫夏草具有“保肺、益肾、止血、化痰、已劳咳，治膈症皆良”等功效，是我国传统的滋补中药[1]。百令胶囊是人工培养麦角菌科真菌冬虫夏草无性型中华柬丝孢子，经现代制药工艺发酵制成虫草菌糖胶囊，主要成分有腺苷、虫草素、蛋白质、多种氨基酸、糖及多种维生素、微量元素等，其药理作用与天然虫草基本一致[2]，常用于多病因造成的慢性肾功能不全及药物肾毒等急性肾功能损害的辅助性治疗。本实验主要观察了百令胶囊对肾移植术大鼠肾功能及肾移植术后排斥反应的影响，旨在为其临床应用提供实验及理论依据。

1 实验资料

1.1 实验动物及分组 SPF级大鼠80只，鼠龄45～60周，体质量(180±20)g，雄性，由湖北医药学院实验动物房提供，实验动物设施使用许可证SYXK(鄂)2011-0031，实验动物生产许可证SCXK(鄂)2011-0008。将80只大鼠采用随机数字表编号随机分为假手术组、模型组、环孢菌素A组、百令胶囊组，每组20只，即供、受体各10只。

1.2 药品试剂及仪器 百令胶囊(杭州中美华东制药有限公司，国药准字Z10910036)，环孢菌素A (上海源叶生物科技有限公司，批号：59865-13-3)，血清丙二醛(MDA)、血清乳酸脱氢酶(LDH)及血清内源性超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)，双人双目手术显微镜(镇江医用光学仪器厂)，日立7150型全自动生化分析仪(日立精密仪器株式会)，氯胺酮、乳酸林格氏液(自制)，无损伤缝合线(9/0、6/0，上海医用缝合线厂生产)。

1.3 大鼠左肾同种异体移植手术方法及给药方法 参照文献[3]，模型组、百令胶囊组供、受体大鼠术前均禁食12 h，自由饮水，称质量，按100 mg/kg 腹腔注射20%氯胺酮麻醉。供体仰卧腹部向上固定于大鼠固定器，腹部正中切口，充分暴露左肾、输尿管及主动脉、腔静脉，手术显微镜下游离左肾，结扎并切断左肾动、静脉，自阴茎背静脉注射125 IU/mL肾素盐水0．5 mL肾素化，自腹主动脉远端穿刺用4 ℃乳酸林格氏液连续灌注到左肾呈黄白后置4℃器官保存冰盒中备用。受体手术同上，将供体左肾移植给受体，吻合肾动、静脉及神经，无损伤缝合线缝合，术后分层关闭腹腔。每日碘伏消毒1次伤口，青霉素80万IU/(100g·d)肌肉注射预防感染，连续1周。假手术组手术过程同上，但不进行移植手术。术后百令胶囊组给予百令胶囊20 mg/kg灌胃并腹腔注射环孢菌素A 2.0 mg/(kg·d)，环孢菌素A组注射环孢菌素A 2.0 mg/(kg·d)，假手术及模型组仅灌等体积生理盐水，1次/d,均连续灌胃3 周。术后保持动物房温度18～25 ℃，湿度50%～80%，大鼠单笼饲养，12 h交替光照使尽快复温，动物苏醒后自由饮水，普通饲料喂养，每日观察动物进食情况，称体质量，及时清理粪便，消毒护理时尽量减少动物的疼痛和不适等人道主义措施[4]。在实验过程中倡导人道的使用和管理实验动物，尽量满足实验动物伦理要求[5]。

1.4 检测指标 灌胃第3周按文献[6]方法心脏取血，采用日立7150型全自动生化分析仪测定血清胱抑素C(Cys C)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平及全血T 淋巴细胞、单核细胞数量，严格按试剂盒说明测定血清MDA、LDH、SOD及IgG水平。统计各组大鼠存活率及存活时间。

2 结 果

2.1 各组大鼠一般情况比较 术后3 周，假手术组无动物死亡，大鼠体毛均有光泽，对光及声音反应敏捷，饮食及饮水量正常，体质量无变化。模型组术后1周有6只死亡，3 周后仅有2只存活，3 周存活率为20%；存活大鼠精神及自洁情况极差，体毛脱落无光泽，蜷缩少动，摄食及饮水量少，体质量降低35%。环孢菌素A组术后1周有3只死亡，3 周后有5只存活，3 周存活率为50%；存活大鼠精神及自洁情况较模型组稍好，体质量降低32%。百令胶囊组术后1周有2只死亡，3周后有7只存活，3 周存活率为70%；存活大鼠精神及自洁情况较模型组稍好，但体毛无光泽，舔足，拒绝活动，摄食及饮水量少，体质量降低30%。

2.2 各组大鼠血清MDA、LDH及SOD水平比较 假手术组治疗前后血清MDA、LDH及SOD水平均正常。肾移植3 周后，模型组血清MDA、LDH水平均明显高于假手术组(P均<0.05)，SOD水平明显低于假手术组(P<0.05)；环孢菌素A组血清MDA、LDH水平明显低于模型组(P均<0.05)，SOD水平高于模型组(P<0.05)，但均未恢复正常水平；百令胶囊组血清MDA、LDH水平均明显低于模型组及环孢菌素A组(P均<0.05)，但均未恢复正常水平。见表1。

2.3 各组大鼠血清Cys C、Cr、BUN水平比较 假手术组治疗前后血清Cys C、Cr、BUN水平均正常。肾移植3 周后，模型组血清Cys C、Cr、BUN水平均明显高于假手术组(P均 <0.05)；环孢菌素A组血清Cys C、Cr、BUN水平均低于模型组(P均 <0.05)，但未恢复到正常水平；百令胶囊组血清Cys C、Cr、BUN水平均明显低于模型组及环孢菌素A组 (P均<0.05)，但均未恢复正常水平。见表2。

表1 各组大鼠血清MDA 、LDH及SOD水平比较

注：①与假手术组比较，P<0.05;②与模型组比较，P<0.05；③与环孢菌素A组比较,P<0.05。

表2 各组大鼠血清Cys C、Cr、BUN水平比较

注：①假手术组比较，P<0.05;②与模型组比较，P<0.05；③与环孢菌素A组比较,P<0.05。

2.4 各组大鼠T淋巴细胞、单核细胞及IgG比较 假手术组治疗前后T 淋巴细胞、单核细胞数量及IgG水平均正常。肾移植3 周后，模型组T 淋巴细胞、单核细胞数量均明显高于假手术组(P均<0.05)，IgG水平正常；环孢菌素A组T 淋巴细胞、单核细胞数量均明显低于假手术组及模型组(P均<0.05)，IgG水平则无明显变化；百令胶囊组T 淋巴细胞、单核细胞数量均明显低于模型组及环孢菌素A组(P均<0.05)；IgG水平则明显高于环孢菌素A组及模型组(P均<0.05)。见表3。

表3 各组大鼠T淋巴细胞、单核细胞及IgG水平比较

注：①与假手术组比较，P<0.05;②与模型组比较，P<0.05；③与环孢菌素A组比较,P<0.05。

3 讨 论

临床上大手术、创伤、烧伤、器官移植、药物肾毒等均可能造成急性肾功能损害，在临床治疗过程中常造成严重后果而危及生命。其病理生理基础是由于器官移植手术损伤较大，术中存在失血，术后血液再通常造成肾急性缺血/再灌注损伤，肾功能损害严重，同时因术后未能及时控制排斥反应、临床疗效不佳、器官移植后巨细胞病毒感染、CsA肾毒性等免疫学或非免疫学因素的存在，均有可能诱发肾功能的急性损伤[7]。此类患者肾功能指标如Cys、BUN及Cr均较高。同时，肾移植手术所造成的急性肾缺血/再灌注损伤后氧自由基大量产生，引起强烈的脂质过氧化反应，血清中可检测出大量脂质过氧化代谢产物MDA。 SOD是清除自由基的一种特性酶，可清除氧自由基，保护细胞免受自由基损害，故测定MDA可间接反映细胞受氧自由基损伤的程度，SOD可以证明药物治疗过程中的抗氧化功能。LDH是一种参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶，主要存在于肾脏组织中，肾移植排异时，血清LDH增高。而T 淋巴细胞、单核细胞及IgG参与排异反应时的细胞免疫及体液免疫过程。故本实验将MDA、LDH、SOD及Cys C 、Cr、BUN、T 淋巴细胞、单核细胞数量及IgG作为观察指标来评价疗效。

百令胶囊具有增强免疫功能、抗氧化、抗纤维化、保护肾功能、抗肿瘤、抗炎等作用，对肾脏、肺脏、肾等脏器有保护作用[8]。其主要成分冬虫夏草有抗炎、调节机体免疫功能、抗脂质代谢作用，其腺苷可使SOD升高，清除自由基，降低脂质过氧化物，改善肾血流，改善肾功能[9]。马瑞霞等[10]证实冬虫夏草可抑制大鼠器官移植时细胞凋亡及凋亡基因FasImR-A的表达，可显著抑制大鼠小肠移植排斥反应，且抑制细胞凋亡具有相加或协同作用。Yu等[11]报道百令胶囊可降低T 淋巴细胞、单核细胞吞噬功能，对实质器官进行选择性排异抑制的同时，反而升高血清IgG，是一种较理想的免疫调节剂，其双向免疫调节作用可增强环孢菌素A抗排异反应药效[12]。

环孢菌素A主要用于肝、肾以及心脏移植的抗排异反应，可与肾上腺皮质激素同用，也可用于一些免疫性疾病的治疗。环孢菌素 A 发挥作用的主要机制是环孢菌素 A 与亲环孢素形成复合物再与依赖钙/钙结合蛋白的钙调磷酸酶作用，抑制活化 T 细胞核因子的去磷酸化使其不能进入核内，从而抑制 IL-2 的产生，使T 淋巴细胞的生成受抑制，降低T 淋巴细胞的吞噬作用[13]。

本研究结果发现，治疗3 周后，百令胶囊组血清Cys C 、Cr、BUN、MDA 、LDH水平及全血T 淋巴细胞、单核细胞数量均明显低于模型组及环孢菌素A组，SOD及IgG水平明显高于模型组及环孢菌素A组。提示百令胶囊联合环孢菌素A可明显抑制肾移植大鼠MDA、LDH的产生,提高SOD活性及IgG合成 ，说明百令胶囊确有抑制脂质过氧化反应、抗氧化应激、抑制MDA 及LDH产生、清除自由基的作用，这与池艳春等[14]报道百令胶囊抗氧化作用相一致。分析认为其作用机制可能与百令胶囊保护肾小管细胞Na+,K+-ATP酶，减轻肾急性缺血/再灌注时细胞脂质过氧化反应造成的组织器官损伤，促进损伤肾小管细胞增殖及修复，抑制肾小球的代偿性肥大，同时抑制醛糖还原酶，减轻早期肾小球对Na、K高滤过病理改变等有关[15]。目前百令胶囊是免疫抑制剂还是免疫调节剂尚无一致结论。本实验结果显示，百令胶囊可促进IgG合成，提高了肾移植后体液免疫力，但同时降低了全血T 淋巴细胞、单核细胞数量,抑制了细胞免疫。故本研究认为百令胶囊是免疫调节剂，在进行选择性细胞免疫抑制的同时，不降低机体的体液免疫功能，对机体免疫系统具有双向调节作用。

综上所述，百令胶囊可降低肾小管对BUN及血清Cr重吸收，进而改善肾功能，其可增强机体免疫功能及环孢菌素A抗排异反应药效, 提高大鼠存活时间及存活率，对移植肾有一定的保护作用。但其抑制移植排斥反应与细胞凋亡是否相关还有待于进一步开展实验研究。

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Effect of Bailing Capsule on renal function and rejection in rats with renal transplantation

ZUO Xia1, GUO Lihong1, LI Li2

(1.Taihe Hospital of Shiyan City, Shiyan 442000, Hubei, China; 2.Hubei University of Medicine, Shiyan 442000, Hubei, China)

Objective It is to observe the influence of Bailing Capsule on renal function and rejection in rat with renal transplantation. Methods 80 rats were randomly divided into sham operation group, model group, Cyclosporin A group and Bailing Capsule group, 20 cases in each. The cases in model group, Cyclosporin A group and Bailing Capsule group were performed orthotopic left kidney transplantation. Then the rats in Bailing Capsule group were treated with Bailing Capsule 20 mg/kg gavage and intraperitoneal injection of Cyclosporin A 2.0 mg/ (kg.d) for 3-week, and with injection of Cyclosporin only in Cyclosporin A model group and saline irrigation only in sham operation group. The levels of cystatin C (Cys C), blood urea nitrogen (BUN), serum creatinine (Cr); serum malondialdehyde (MDA), lactate dehydrogenase (LDH) and serum superoxide dismutase (SOD), Immunoglobulin G (IgG), whole blood T lymphocyte, monocyte number were detected, and the rat survival time and survival rate were compared between two groups. Results In Bailing Capsule group, the levels of serum Cys C, BUN, Cr, MDA, LDH and the number of T lymphocyte, monocyte were decreased obviously, and the levels of serum SOD, 1gG were elevated markdely, the rat survival time and survival rate were increased significantly. There were significant differences to compared with the model group and Cyclosporin A group (allP<0.05). Conclusion Bailing Capsule can significantly inhibit lipid peroxidation, increase the activity of SOD, scavenge of MDA after renal transplantation, and enhance immunity and anti rejection drug efficacy of Cyclosporin A, reduce renal transplantation postoperative renal ischemia / reperfusion on renal function damage, promoting the recovery of renal function, improve the rat survival time and survival rate, has a protective effect on the transplanted kidney

rat; Bailing Capsule; renal transplantation; immune regulation; renal function

左霞，女，研究方向为临床药理及外科护理。

李莉，E-mail：cdscds1226@126.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.12.009

R-332

A

1008-8849(2015)12-1279-04

2014-12-08