采用M allory染色法制作脑垂体组织切片

李 莉，柳 洁

（湖南医药学院 组织胚胎学教研室，湖南怀化418000）

采用M allory染色法制作脑垂体组织切片

李 莉，柳 洁

（湖南医药学院 组织胚胎学教研室，湖南怀化418000）

目的：探讨采用Mallory染色法制作脑垂体组织切片制作方法。方法：取成年人脑垂体，Helly固定液，固定24h，自来水冲洗24h后进行脱水、包埋、切片、脱蜡、脱汞等步骤配置染液。结果：Mallory染色的脑垂体远侧部中嗜酸性细胞呈深红色，胞质中嗜酸性颗粒清晰可见，嗜碱性细胞呈紫蓝色，胞质中的嗜碱性颗粒也清晰可见，嫌色细胞体积较小，胞质少。染色较浅，故细胞界限不清楚。结论：组织固定液需Helly，效果好。染液中95%乙醇分色十分关键，一定要在显微镜下严格控制，否则细胞的颜色颗粒难以显示清晰。染液现染现配，需过滤。

Mallory染色法；脑垂体组织切片；染液配置

脑垂体是人体内最复杂的内分泌腺，分泌多种激素，分为腺垂体与神经垂体，腺垂体又分为结节部、中间部和远侧部，远侧部有嗜酸性细胞，嗜碱性细胞和嫌色细胞三种，其功能的复杂性决定了组织结构的复杂性。人脑垂体是很难得的材料，同时显示上述的三种细胞，虽染色方法很多，但效果不佳［1］，为此经过反复的实验，我们采用曼氏（Mallory）染色法的改良，既能观察脑垂体的结构，又能腺垂体内嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞3种细胞的形态特点清晰可辨且颜色亮丽，取得满意的效果。

1 材料和方法

1.1 取材和固定：取成年人脑垂体，Helly固定液（含有重铬酸钾2.5g，氯化汞5g，硫酸钠1.0g，蒸馏水100mL，甲醛10m L），固定24h，自来水冲洗24h。

1.2 脱水、包埋与切片：30%的乙醇梯度上行至无水乙醇进行脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋，切片，切片厚度4μm。

1.3 脱蜡：二甲苯去蜡2h（室温高1h，室内室温2h）。

1.4 脱汞：切片从二甲苯取出，由无水乙醇上行至70%的乙醇脱水，再入Lugol氏碘乙醇3～5min，除去组织中的汞盐沉淀后，自来水流水冲洗3min，至5%的硫代硫酸钠液洗去棕色，至切片组织无色，约2min后，自来水冲洗2min，入蒸馏水后再入MalloryI染色液媒染3min。

1.5 染色程序：切片入MalloryI染色液3min。蒸馏水洗，入MalloryⅡ染色中2min，蒸馏水洗，稍吸干入70%～95%乙醇分色。镜下鉴别再上行至无水乙醇，二甲苯透明，中性树脂封固。

2 染液配置

2.1 MalloryI染色液：酸性复红0.5g，蒸馏水100mL。

2.2 MalloryⅡ染色液：磷钨酸1.0g，蒸馏水100mL。

2.3 MalloryⅢ染色液：甲苯胺蓝0.5g，桔黄G2.0g，草酸2.0g，蒸馏水100mL。

3 染色结果

Mallory染色的脑垂体远侧部中嗜酸性细胞呈深红色，胞质中嗜酸性颗粒清晰可见，嗜碱性细胞呈紫蓝色，胞质中的嗜碱性颗粒也清晰可见，嫌色细胞体积较小，胞质少。染色较浅，故细胞界限不清楚。

4 注意事项

4.1 组织的取材一定要迅速，固定液用Helly固定液效果较其他固定液好。

4.2 切片的厚度4μm较适宜观察。

4.3 脱蜡、脱汞要彻底，否则影响染色的效果。

4.4 组织在MalloryⅢ染色液时间不能太长，否则整个组织昏暗不亮。

4.5 组织在95%乙醇分色，镜下观察尤为重要，分色至嫌色细胞核清晰，整个视野清楚为止。

4.6 染液不能存放太久，否则影响染色效果。

4.7 染液需过滤处理，方能使用。

5 讨论

能观察脑垂体的组织结构，区分腺垂体的三种细胞，是组织学教学的需要［2］。制作优良的脑垂体切片标本，多年来一直困扰技术人员。显示脑垂体细胞的方法很多。以往采用HE染色法，此方法染色效果不理想，脑垂体的各种细胞不易区分［3］。我们使用Mallory染色法，脑垂体远侧部切片中嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞，形态清晰，且颜色亮丽，非常适合组织学实验教学使用，提高了学生对脑垂体各种细胞的辨认能力和实验教学效果［4］。该染色法染色时注意的问题是：组织固定液需Helly，效果好。染液中95%乙醇分色十分关键，一定要在显微镜下严格控制，否则细胞的颜色颗粒难以显示清晰。染液现染现配，需过滤。

［1］王志东，张子军.弹力纤维染色方法的改良与体会 ［J］.中国实用医药，2013，8（26）：245－246.

［2］郝奋，岳淑芬，黄世琪.脑垂体Mallory染色的体会［J］.包头医学院学报，2003，5（4）：313.

［3］柳洁，马晓健.两种染色方法对脑垂体三种嗜色细胞显示效果比较［J］.解剖学杂志，2003，5（3）：362.

［4］尚宏伟，张立新，路欣，等.不同染色方法对人脑垂体细胞显示效果的比较［J］.解剖学研究，2013，6（3）：208.

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