抗核仁抗体在肝病患者中的检测及其意义

马胤雪，闫惠平，张海萍，冯　霞，孙丽梅，赵丹彤

(首都医科大学附属北京佑安医院 感染与免疫研究中心·乙型肝炎与肝癌转化医学研究北京市重点实验室，北京100069)

抗核仁抗体在肝病患者中的检测及其意义

马胤雪，闫惠平*，张海萍，冯霞，孙丽梅，赵丹彤

(首都医科大学附属北京佑安医院 感染与免疫研究中心·乙型肝炎与肝癌转化医学研究北京市重点实验室，北京100069)

(ChinJLabDiagn,2015,19:0567)

抗核仁抗体(anti-nucleolar antibodies,ANoAs)是Beck等在1962年用间接免疫荧光法在自身免疫病患者血清中首次确认的[1]，被认为与系统性硬化症(Systemic sclerosis，SSc)相关，在少数其他自身免疫病和肿瘤患者中亦可检测到。我们在多年的工作中发现，很多肝病患者血清抗核仁抗体阳性。然而，抗核仁抗体阳性主要见于哪种类型的肝病患者，与患者的病情进展是否相关还不太清楚。我们总结了抗核仁抗体在肝病患者中的分布特征如下。

1对象与方法

1.1　研究对象

研究对象来自2012年1月至5月期间住院及门诊的5506例肝功能异常患者清晨空腹不抗凝血2 ml,离心后吸取血清，-20℃冰箱保存。

1.2　检测方法

1．2.1间接免疫荧光法(IIF)检测血清中抗核抗体(anti-nuclear antibody，ANA)、抗线粒体抗体(anti-mitochondrial antibody，AMA)、抗平滑肌抗体(anti-smooth muscle antibody，SMA)等，使用德国欧蒙公司的自身抗体试剂盒，本法采用Hep-2细胞和5种组织(猴肝脏、猴心肌组织、猴髂腰肌、大鼠胃和大鼠肾)的冰冻切片作为抗原，以生物薄片技术将带有细胞和组织的6种切片组合成一个反应区。待检血清按1∶100稀释，与各种组织细胞共同孵育30 min，洗片，加入酶标记物，继续孵育30 min，洗净后用甘油封片。在荧光显微镜下判读结果。组织或细胞核内出现特征性绿色荧光，血清稀释度 ≥1∶100为阳性。通过镜下ANA的核型筛选出抗核仁抗体。

1.2.2诊断标准原发性胆汁性肝硬化(PBC)的诊断参照2009年美国肝病学会“PBC诊断治疗指南”[2]，自身免疫性肝炎(AIH)的诊断参照 2010年国际自身免疫性肝炎工作组制定的诊断标准[3]，乙型、丙型病毒性肝炎及肝硬化参照2010年中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会制定的《慢性乙肝防治指南》[4]和2004年中华医学会肝病学分会、中华医学会传染病与寄生虫病学分会制定的《丙型肝炎防治指南》[5]。

1.3　统计学方法

2结果

2.1　抗核仁抗体的检出情况

5506例肝病患者血清中检测出抗核仁抗体阳性的患者为264例，占4.8%。阳性结果中抗核仁抗体滴度1∶100的有170例，占阳性的64.4%；滴度1∶320的有53例，占20.1%；滴度≥1∶1 000的有41例，占15.5%，部分患者同时检出伴有一种或两种其他自身抗体。主要比例分布见表1。

表1　264例抗核仁抗体阳性患者的滴度分布和伴有其他自身抗体情况

2.2　264例抗核仁抗体阳性患者的年龄分布情况

264例抗核仁抗体阳性患者中男性149例(56.4%)，平均年龄48±14岁；女性115例(43.6%)，平均年龄51±14岁。其中40-59岁患者比例较高。年龄分段百分比见表2。

表2　264例抗核仁抗体阳性患者年龄段分布【n(%)】

2.3　264例抗核仁抗体阳性患者肝病临床分期和抗体滴度分布情况

264例抗核仁抗体阳性肝病患者中肝炎155例(58.7%)，肝硬化81例(30.7%)，肝癌28例(10.6%)。264例抗核仁抗体阳性的肝炎、肝硬化和肝癌患者中，以低滴度为主(1∶100)，其中以肝硬化患者的比例稍高；而高滴度(≥1∶1 000)比例在肝癌中明显升高，可见抗核仁抗体高滴度以在肝癌患者中较为常见。见表3。

2.4　264例抗核仁抗体阳性患者的病原病因分布情况

抗核仁抗体阳性患者按病原病因可分为乙肝(112例)、丙肝(60例)、甲&戊肝(8例)、自身免疫性肝病(7例)、药物性肝病(34例)、酒精性肝病(16例)、脂肪肝(7例)、不明原因性肝病(20例)。按滴度分为1∶100和≥1∶320两组，每种病因各自计算其所占比例，发现在高滴度(≥1∶320)中自身免疫性肝病(85.7%)所占比例最高，药物性肝病(70.6%)次之。可见抗核仁抗体阳性患者在自身免疫性肝病和药物性肝病中比较常见。按病原病因分组见表4。

表3　抗核仁抗体在肝炎、肝硬化和肝癌患者中的滴度分布

表4　264例抗核仁抗体阳性患者的病原病因分布情况

3讨论

核仁是由蛋白质和核糖体DNA组成的独特球形结构，位于细胞核内。抗核仁抗体可以识别多种核仁结构组分，包括Th/To-RNP,U3-RNP,RNAP-Ⅰ,RNAP-Ⅱ和RNAP-Ⅲ。目前，抗核仁抗体被认为与SSc的病情进展及预后相关。SSc患者血清中，不同类型抗核仁抗体的阳性率不同，但未有高过20%-30%。抗核仁抗体在其他自身免疫性疾病和肿瘤中也可以检测到。夏晴等报道自身抗体阳性的癌症患者中约有10.9%的有抗核仁抗体成分[6]。

肝病患者的自身抗体以非器官特异性的ANA为主，常见的核型包括颗粒型、均质型、核仁型、着丝点等。闫惠平等报道，在PBC患者中，ANA阳性的患者以核膜性、核点型和着丝点型最多见，少见的荧光模式有抗干燥综合征A/B、细胞核均质型、核仁型及颗粒型等[7]。张海萍等报道5.3%的HBV感染患者自身抗体的荧光模式表现为核仁型[8]。但是抗核仁抗体在肝病患者中的报道比较零散，病例数有限。我们研究了5506例各种病因的肝功能异常患者，分析了其中抗核仁抗体的检测结果，发现：(1)4.8%(264例)的肝功异常患者抗核仁抗体阳性，以低滴度为主，但是264例中有35.6%的患者表现为

高滴度(≥1∶320)。(2)抗核仁抗体阳性患者中男性149例(56.4%)，女性115例(43.6%)。以40-59岁患者比例较高。(3)抗核仁抗体在肝炎(155例)、肝硬化(81例)和肝癌(28例)患者血清中可被检测到，且以低滴度为主(1∶100)。其中肝硬化患者的比例稍高(比例分别为62.6% VS 70.4% VS 57.1%)；而在高滴度(≥1∶1000)中，肝癌患者抗核仁抗体的比例明显升高，可见抗核仁抗体高滴度以在肝癌患者中较为常见(比例分别为16.1% VS 11.1% VS 25.0%)。提示在慢性肝病进展过程中自身免疫的变化可能多集中在与细胞增殖，分裂有关的核仁成份上。(4)按病原病因可分为乙肝、丙肝、甲&戊肝、自身免疫性肝病、药物性肝病、酒精性肝病、脂肪肝、不明原因性肝病。在高滴度(≥1∶320)中自身免疫性肝病(85.7%)所占比例最高，药物性肝病(70.6%)次之。可见抗核仁抗体阳性患者在自身免疫性肝病和药物性肝病中比较常见。

参考文献：

[1]Beck JS，Anderson JR，Mc EA，et al.Antinucleolarantibodies[J].Lancet,1962,2：575.

[2]Lindor KD,Gershwin ME,Poupon R,et al.Primary biliary cirrhosis[J].Hepatology,2009,50:291.

[3]Manns MP,Czaja AJ,Gorham JD,et al.Diagnosis and management of autoimmune hepatitis[J].Hepatology,2010,51(6):2193.

[4]中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会[J].慢性乙型肝炎防治指南.中华肝脏病杂志，2011，19(1)13.

[5]2004年中华医学会肝病学分会，中华医学会传染病与寄生虫病学分会[J].丙型肝炎防治指南，2004，12(4)：192.

[6]夏晴,仲人前,范列英，等.385例癌患者自身抗体检测结果分析[J].上海医学检验杂志,2001，16(1):5．

[7]闫惠平，庄辉，刘燕敏，等．原发性胆汁性肝硬化患者的免疫学特点分析[J].中华肝脏病杂志；Vol.13(1)：12．

[8]张海萍，闫惠平，冯霞,等．乙肝病毒感染者血清抗核抗体特征及其临床相关性[J].首都医科大学学报，2007，28(2):154．

摘要：目的探讨肝病患者中抗核仁抗体(ANoAs)出现的特点及其临床意义。方法采用间接免疫荧光法对5506例肝病患者进行抗核抗体(ANA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗平滑肌抗体(SMA)等检测，通过镜下ANA的核型筛选出抗核仁抗体。结果(1)5506例患者中抗核仁抗体阳性患者为264例(4.8%)。其中64.4%为1∶100(170例)、20.1%为1∶320(53例)、15.5%为≥1000(41例)。部分患者伴有其他自身抗体。(2)在264例抗核仁抗体阳性肝病患者中肝炎为155例、肝硬化为81例和肝癌为28例，病因包括甲、乙、丙型等病毒性感染、药物性、酒精性、自身免疫性等多种原因。抗核仁抗体以低滴度(1∶100)为主，以肝硬化患者的比例稍高(比例分别为：62.6% VS 70.4% VS 57.1%)；而高滴度抗核仁抗体(≥1∶1000)中以在肝癌患者中较为常见(比例分别为：16.1% VS 11.1% VS 25.0%)。(3)抗核仁抗体男性149例(56.4%)，女性115例(43.6%)。以40-59岁患者比例较高。结论抗核仁抗体以40-59岁患者较多。在肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中均可被检测到，以低滴度(1∶100)为主，肝硬化患者的比例稍高；而在高滴度(≥1∶1000)中，抗核仁抗体以在肝癌患者中较为常见。提示在慢性肝病进展过程中自身免疫的变化可能多集中在与细胞增殖，分裂有关的核仁成份上。

关键词：自身抗体，抗核仁抗体；肝硬化；肝癌；

Detection and Significance of Antibodies to nucleolus in patients with various liver diseasesMAYin-xue,YANHui-ping，ZHANGHai-ping,etal.(DepartmentofInfectionandImmunity,BeijingYou'anHospital,CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the features and clinical significance of anti-nucleolar antibodies(ANOAS) in patients with various liver diseases.Methods5506 serum samples from patients with various liver diseases were detected anti-nuclear antibody(ANA),anti-mitochondrial antibody(AMA),anti-smooth muscle antibody(SMA) by indirect immunofluorescent assay(IIF),The ANOAS pattern is recognized by immunofluorescence using hep-2 cells as substrate.Results(1)264 of the 5506 patients with various liver diseases(4.8%) were ANOAS positive,In 264 ANOAS positive patients,64.4% had an ANOAS titer of 1∶100,20.1% 1∶320(53 cases) and 15.5% more than 1∶1 000(41 cases).Some patients were with other autoantibodies.(2) Among 264 ANOAS positive cases,155 with hepatitis,81 with liver cirrhosis(LC) and 28 with hepacellular carcinoma(HCC) the causes including Hepatitis A/B/C virus infection,drug,alohol,autoimmune and other reasons.Low titer(1∶100) of ANOAS was presented in the 3 groups,the high titre(1∶1 000) was more common among hepatitis group,LC group and HCC group(respectively:16.1% vs 11.1% vs 25%).(3) Among 264 ANOAS positive patients,149 were male(56.4%),115 female(43.6%).The Age of ANOAS positive patients was ranging from 40-59 years old.ConclusionThe age of ANOAS positive are common in 40-59 years old.low titer(1:100) of ANOAS was presented in the hepatitis group,LC group and HCC group.The high titer(1:1000) are more common founded in HCC group,indicating that autoimmune phenomenon may be concentrated in the nucleolus related with cells proliferation and division related components.

Key words:Autoantibodies；Anti-nucleolar antibodies；Liver cirrhosis；Hepacellular carcinoma

收稿日期：(2014-03-17)

文献标识码：A

中图分类号：R575.2

文章编号：1007-4287(2015)04-0567-03

通讯作者*,yhp503@126.com

基金项目：卫生部医药卫生科技发展研究中心(28-5-5)