猪囊尾蚴和华支睾吸虫液相基因芯片检测方法的建立

刘 畅，路义鑫，杨朋欣，李晓云，王 泽，汪 洋，宋铭忻

(东北农业大学 动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030)

猪囊尾蚴(Cysticercus cellulose)和华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)可以感染人和动物导致囊尾蚴病和华支睾吸虫病[1]。脑囊尾蚴病是因中枢神经系统感染囊虫而呈现出不同的临床症状，包括癫痫症和脑积水[2]；华支睾吸虫病最常见表现为肝吸虫病，严重者甚至发展为胆管癌[3]。最新寄生虫血清流行病学调查显示，中国大陆猪囊尾蚴和华支睾吸虫人群感染率分别为0.58 %和0.55 %[4]。由于现代人饮食来源和方式的多样化，猪囊尾蚴和华支睾吸虫等感染引起的食源性寄生虫病造成的食品安全问题愈发突出，并且成混合感染趋势[4-5]。因此，加强寄生虫猪囊尾蚴和华支睾吸虫的检测尤为重要。

目前，寄生虫的检测方法主要是基于PCR 方法的分子生物学检测手段，包括多重PCR、荧光定量PCR、环介导等温扩增技术、PCR-RFLP 技术等[6-10]。液相基因芯片技术是近年来出现的一种结合Luminex xMAP(液相芯片)系统与多重PCR 技术的新型检测手段，可以满足高通量多指标同步、迅速和高效的检测微生物的要求[11-12]。国内鲜有关于液相基因芯片寄生虫检测的报道[13-14]，而同时检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫两种虫体仍无相关报道。本研究以猪囊尾蚴ITS 基因和华支睾吸虫ITS 基因为靶序列，设计并合成特异性探针和引物，扩增目的片段并构建阳性重组质粒标准品，建立一种基于双重PCR 的高效、灵敏和特异的液相基因芯片检测方法。

1 材料和方法

1.1 虫 株 猪囊尾蚴由兰州兽医研究所惠赠，为吉林省长春株；……