不同产地的板蓝根药材的指纹特征研究

罗燕玉 黄晓丹 苏金平 和海龙

不同产地的板蓝根药材的指纹特征研究

罗燕玉 黄晓丹 苏金平 和海龙

目的分析板蓝根药材产地与指纹图谱特征的关联性。方法采用高效液相色谱法(HPLC), 使用Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱, 用甲醇-水梯度洗脱, 流速为1ml/min, 检测波长为224 nm, 柱温25℃, 对板蓝根药材指纹特征进行研究。结果将板蓝根药材的产地按地理纬度分为3个纬度区间, 即：安徽、河南、甘肃3个省为第一纬度区间, 纬度为北纬33～37°；河北为第二纬度区间, 纬度为北纬39～41°；黑龙江和内蒙古两省区为第三纬度区间, 纬度为北纬41～49°。各个区间产的板蓝根药材指纹特征相似。结论药材产地的纬度位置是造成板蓝根药材指纹特征差异的主要原因之一。

板蓝根药材；指纹图谱；产地

板蓝根为十字花科植物菘蓝(isatis indigotica fort)的干燥根, 始载于《神农本草经》, 是重要的传统中药材之一。板蓝根具有清热解毒、凉血利咽等功效, 临床上常用于流行性腮腺炎、流行性乙型脑炎、流感等病毒性感染的防治, 近年来又发现板蓝根具有抗血小板聚集、抗内毒素及增强机体免疫功能等作用[1-3]。

板蓝根主要分布于河南、安徽、黑龙江等地[4], 化学成分较为复杂, 含有生物碱、芥子苷、黄酮等10余类成分, 不同产地的板蓝根药材整体质量差异大。为了探索不同产地的板蓝根药材存在的差异, 本实验拟通过各药材的指纹图谱特征得出不同产地的板蓝根内在质量的规律, 为板蓝根药材的质量控制提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪(安捷伦公司)；GT210-G电子天平(Sartorius)；HWS26型电热恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司)。

1.2 材料 甲醇为色谱纯, 正丁醇为分析纯, 试验用水为纯化水。28批板蓝根药材(批号：0909001～0909028)经中国科学院华南植物园华南植物鉴定中心叶华谷研究员鉴定, 均为十字花科植物菘蓝干燥的根部。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[5,6]色谱柱为Ultimate XB-C18分析柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；以甲醇为流动相A, 水为流动相B,梯度洗脱(0～19 min, A为19%, B为81%；28 min, A为29%, B为71%；45～55 min, A为38%, B为62%；72～75 min, A为70%, B为30%。)；流速为1 ml/min；检测波长224 nm；柱温25℃。

2.2 供试品溶液的制备[7]称取板蓝根药材粉末(过3号筛)5.0 g, 加水100 ml加热回流30 min, 抽滤, 滤液浓缩至约25 ml, 用水饱和正丁醇振摇提取3次(40、30、30 ml), 合并提取液, 用正丁醇饱和水50 ml振摇提取一次, 取正丁醇液,蒸干, 残渣加甲醇使溶解, 转移至5 ml容量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

2.3 数据采集及初步评价 分别精密吸取批号为0909001～0909028 的板蓝根药材供试品溶液5 μl, 注入液相色谱仪, 测定, 记录 75 min色谱图, 建立指纹图谱共有模式并计算其相似度。结果可得, 除 0909004批药材的相似度较低外, 其余27 批药材与共有模式的相似度均＞ 0.7。

2.4 不同产地药材的指纹图谱的特征分析 通过比较, 以上28批药材的特征图谱按照峰形可以分成3类：第一类图谱是图谱中各特征峰的峰高基本一致, 无特别突出的强峰, 河北安国产的板蓝根具有这种特征；第二类图谱是在约16.5 min时有一强特征峰, 其峰高明显高于其他峰的峰高, 河南、安徽、甘肃三省区产的板蓝根均具有这一特征；第三类图谱是最强峰为23～25 min时出现的一组峰, 主要是黑龙江与内蒙古产的板蓝根具有这类特征。

2.4.1 河北安国产板蓝根的共有模式 从河北省安国市不同村共收集了7 批板蓝根样品, 其指纹图谱特征基本一致,均无明显的强吸收峰, 其指纹图谱共有模式见图1。

图1 河北安国产板蓝根的指纹图谱共有模式

2.4.2 安徽-河南-甘肃产板蓝根共有模式 从安徽阜阳收集3 批、亳州收集1批, 河南安阳和禹州各收集2 批, 甘肃陇西收集1批, 共9批板蓝根样品具有基本一致的指纹特征, 均在约16.5 min时有一相对较强的特征峰, 其指纹图谱共有模式见图2。

图2 安徽-河南-甘肃产板蓝根的指纹图谱共有模

2.4.3 黑龙江-内蒙古产板蓝根的共有模式 从黑龙江大庆收集10批、鹤岗收集1 批, 内蒙古赤峰收集1 批, 共12批板蓝根样品具有基本一致的指纹特征, 即在23～25 min时出现的一组强特征峰, 其指纹图谱共有模式见图3。

图3 黑龙江-内蒙古产板蓝根的指纹图谱共有模式

结合不同产地板蓝根药材指纹图谱共有模式的研究结果分析可知, 三个指纹图谱共有模式代表的产地, 其地理纬度分布存在一定规律即：安徽、河南、甘肃3个省的产地为第一纬度区间, 为北纬33～37°；河北的产地为第二纬度区间,为北纬 39～41°；黑龙江和内蒙古两省区的产地为第 三纬度区间, 为北纬 41～49°。由此可见, 以上三个指纹图谱共有模式代表的产地与3个纬度分布区间完全吻合, 即纬度位置相同的产地, 其板蓝根药材的指纹图谱特征基本相似, 随着纬度的增加, 16.5 min 附近的强峰的逐渐减弱, 而23～25 min的一组峰则逐渐增强。以上结果表明, 药材产地的纬度位置是造成药材指纹特征差异的主要原因之一。

3 小结

3.1 本实验采用的指纹图谱分析方法, 经过大量的实验摸索及方法验证所得, 能有效的测定出板蓝根药材的各成分,共有22个特征色谱峰。

3.2 本实验收集的28批样品, 采自河南、安徽、河北、甘肃、黑龙江、内蒙古等6省区, 区域分布比较均衡, 能体现不同产地的板蓝根药材指纹图谱的特征, 具有较强的代表性。

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[3]秦箐, 贺海平. 板蓝根中高级不饱和脂肪酸的分离鉴定及其免疫活性的研究. 中国现代医学杂志, 2001, 11(1):105-106.

[4]刘盛, 谢华, 乔传卓. 板蓝根药材道地性初步研究总结. 中药材, 2001, 24(5):319-321.

[5]孟岩, 范丽芳, 张兰桐. 河北道地药材板蓝根HPLC指纹图谱研究. 河北医药, 2012, 34(11):1720-1723.

[6]林文艳, 莫建霞, 于荣敏, 等. 板蓝根药材HPLC指纹图谱研究.中国现代应用药学杂志, 2005, 22(5):378-380.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.18.215

2015-06-03]

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黄晓丹