小鼠足细胞Tbxa2r基因敲低方法探讨

孔维信,邓振兴，张林，孙怀鑫，丁露露(上海交通大学医学院苏州九龙医院，江苏苏州50；山东省医学科学院附属医院)

·基础研究·

小鼠足细胞Tbxa2r基因敲低方法探讨

孔维信1,邓振兴2，张林1，孙怀鑫1，丁露露1(1上海交通大学医学院苏州九龙医院，江苏苏州21502；2山东省医学科学院附属医院)

摘要：目的设计并筛选对足细胞血栓素A2受体(Tbxa2r)基因表达敲低效果最佳的siRNA序列。方法培养永生性小鼠足细胞(MPC5)，取生长占培养板70%细胞用于实验。设计4条siRNA序列(Tbxa2r-mus-1150、Tbxa2r-mus-1309、Tbxa2r-mus-1677、Tbxa2r-mus-1884)，经转染效率验证后转染足细胞。将细胞分为四组：干扰组(以筛选出的干扰序列转染细胞)、空白组(正常细胞样品)、模拟组(只加转染试剂的细胞样品)、阴性对照组(转染无序干扰系列的细胞样品)。Real-time PCR检测各组细胞Tbxa2r基因，Western blot法检测Tbxa2r蛋白。结果筛选出干扰效果最强的siRNA序列Tbxa2r-mus-1677，其转染24 h后对Tbxa2r基因表达干扰效果较小，而在转染48 h后足细胞Tbxa2r基因相对表达量最低。转染72 h后，细胞Tbxa2r蛋白相对表达量明显降低。结论采用Tbxa2r特异性siRNA技术成功敲低足细胞Tbxa2r基因表达，并筛选出敲低效果最佳的siRNA序列。

关键词：足细胞；血栓素A2受体基因；小分子RNA干扰技术；基因敲低

血栓素A2(TXA2)是花生四烯酸代谢过程中生成的产物。TXA2及血栓素受体激活参与血管紧张素Ⅱ依赖性高血压、糖尿病肾病的发生发展[1]。有研究表明，血栓素合成酶抑制剂或血栓素受体拮抗剂对链脲佐菌素诱导的肾损伤、狼疮性肾炎、环孢素肾毒性、残余肾及肾移植物排异反应均有疗效，但作用机制尚不明确[2]。2011年7月……