TACE和RFA治疗肝细胞肝癌对机体细胞免疫功能的影响

王 艳,田荣华

(湖北省孝感市中心医院磁共振室 432000)



·论 著·

TACE和RFA治疗肝细胞肝癌对机体细胞免疫功能的影响

王 艳,田荣华△

(湖北省孝感市中心医院磁共振室 432000)

目的 探讨肝动脉栓塞化疗(TACE)和经皮肝脏射频消融术(RFA)治疗肝细胞肝癌对机体细胞免疫功能的影响。方法 选取84例乙肝相关肝细胞肝癌患者，根据介入治疗方式分为TACE组(n=52)和RFA组(n=32)，其中TACE组大肝癌患者18例(直径大于5 cm)，小肝癌患者34例(直径小于或等于5 cm)；RFA组大肝癌患者15例，小肝癌患者17例。分别于患者术前、术后24 h及术后7 d采用FACS Calibur流式细胞仪对免疫细胞亚群进行检测。结果 TACE组小肝癌患者术后7 d时CD4+和CD4+/CD8+均较术前减少，差异有统计学意义(P<0.05)，RFA组小肝癌患者术后7 d时CD4+和CD4+/CD8+均较术前升高，但CD8+降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；TACE组大肝癌患者术后24 h时和术后7 d时CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均较术前降低，且术后7 d时CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均较术后24 h时升高，差异均有统计学意义(P<0.05)，RFA组大肝癌患者术后24 h时CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均较术前降低，术后7 d时CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均较术前升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；术后7 d时RFA组大小肝癌患者CD4+/CD8+高于TACE组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 无论是TACE还是RFA，均会对肝癌患者免疫功能产生影响，RFA对患者术后肝功影响较小，且有利于免疫功能恢复。

肝细胞肝癌； 肝动脉栓塞化疗； 经皮肝脏射频消融术； 细胞免疫

肝细胞肝癌是位于世界常见肿瘤第5位的恶性肿瘤，我国患者约占全世界的55%，属于高发国家，对于早期肝癌手术治疗最有效[1]。肝动脉栓塞化疗(TACE)和经皮肝脏射频消融术(RFA)是对于无法进行手术治疗患者的两种首选非手术介入治疗方法，并取得了一定临床效果[2-3]。然而，有研究指出，对于乙肝病毒所致肝细胞肝癌患者在行介入治疗后会出现病毒感染反弹[4]。亦有研究指出，介入微创治疗术后机体免疫功能会发生改变[5]。目前对于介入治疗是否会对机体免疫产生影响尚无统一结论。因此，本研究进一步探讨TACE和RFA治疗对肝细胞肝癌患者术后机体免疫功能的影响，以期为临床实践提供基础资料。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年3月至2013年4月在本院进行介入治疗的乙肝相关肝细胞肝癌患者84例，其中男71例，女13例，年龄31～73岁，平均(56.8±9.4)岁，所有患者均经肝穿刺病理确证为肝细胞肝癌。Child-Pugh分级：A级69例，B级15例。治疗前65例患者接受规范服用核苷类抗病毒治疗3个月以上，19例未进行治疗。根据患者介入治疗方式分为TACE组和RFA组，其中TACE组52例，男45例，女7例；平均年龄(57.3±9.0)岁；Child-Pugh分级：A级44例，B级8例；肿瘤直径大于5 cm者18例，作为大肝癌组，肿瘤直径小于或等于5 cm者 34例，作为小肝癌组；甲胎蛋白(AFP)水平(367.6±49.7)ng/mL；包膜完整37例(71.2%)，不完整15例(28.8%)；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期32例(61.5%)，Ⅲ～Ⅳ期20例(38.5%)；病理学分级：低分化17例(32.7%)，中分化18例(34.6%)，高分化17例(32.7%)。RFA组32例，男26例，女6例；平均年龄(56.2±10.2)岁；Child-Pugh分级：A级25例，B级7例；肿瘤直径大于5 cm者15例，作为大肝癌组，肿瘤直径小于或等于5 cm者17例，作为小肝癌组；AFP水平(373.2±53.4)ng/mL；包膜完整21例(65.6%)，不完整11例(34.4%)；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期21例(65.6%)，Ⅲ～Ⅳ期11例(34.4%)；病理学分级：低分化9例(28.1%)，中分化12例(37.5%)，高分化11例(34.4%)。TACE组和RFA组患者在年龄、性别、Child-Pugh分级、AFP水平、包膜完整性、TNM分期、病理学分级等一般情况方面差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 TACE组 所有患者均采取Seldinger技术，将导管经皮股动脉选择性置入肝总动脉，注入造影剂，对肿瘤部位、大小和血供情况进行观察，明确肿瘤血供后，将微导管超选择性置入肿瘤靶供血动脉，将化疗药物(5-氟尿嘧啶500～1 000 mg+表阿霉素20～40 mg)和栓塞剂(明胶海绵1～2 mm+超液态碘油5～15 mL)经导管进行灌注，对靶动脉进行封闭。

1.2.2 RFA组 所有患者术前禁饮禁食，采用Cool-tip冷循环射频治疗系统(购自美国Radionics公司)对患者进行冷循环射频消融，参数设置：电极针17 G、针尖长度3 cm，电流1～2 A，功率100～200 W，频率480 kHz。在超声引导下进行定位，根据肿瘤形状对电极针布放方式进行设计，使消融覆盖整个肿瘤，并超过肿瘤边缘0.6～1.0 cm，每针消融12 min，术后针尖温度超过70 ℃。治疗后24～48 h进行增强CT复查，对消融范围进行观察，对于消融不彻底的患者，7 d后再行RFA。

1.2.3 实验室检测 分别于患者术前、术后24 h及术后7 d时抽取患者外周静脉血10 mL，抗凝，采取密度梯度离心法用淋巴细胞分离液对外周血有核细胞进行分离，并进行标记染色25 min，加入细胞裂解液10 mL摇晃均匀，室温条件下孵育15 min，在233 g离心力下离心10 min，弃上清液，采用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗2次。采用FACS Calibur流式细胞仪(购自美国BD公司)对免疫细胞亚群进行检测，采用Cell Quest软件获取细胞并进行分析。分别于术前和术后7 d时采用日立7180型全自动生化分析仪(购自日本日立公司)对患者肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、清蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)进行检测。

2 结 果

2.1 4项肝功能指标在TACE患者术前和术后结果比较 见表1。TACE组患者中小肝癌组患者ALT、AST、ALB和TBIL 术前和术后差异均无统计学意义(P>0.05)；大肝癌组患者ALT、AST和TBIL术后均高于术前，而ALB低于术前，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表1 4项肝功能指标在TACE患者术前和术后结果比较

注：与术前相比，*P<0.05。

2.2 4项肝功能指标在RFA患者术前和术后结果比较 见表2。RFA组患者中小肝癌组患者ALT、AST、ALB和TBIL 术前和术后差异均无统计学意义(P>0.05)；大肝癌组患者术后ALT高于术前，而AST低于术前，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表2 4项肝功能指标在RFA患者术前和术后结果比较

注：与术前相比，*P<0.05。

2.3 4项免疫细胞在TACE患者术前和术后变化情况 见表3。TACE组患者小肝癌组患者术后24 h时CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+差异均无统计学意义(P>0.05)，术后7 d时CD4+和CD4+/CD8+均较术前减少，差异均有统计学意义(P<0.05)；大肝癌组患者术后24 h时和术后7 d时CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均较术前降低，差异均有统计学意义(P<0.05)，且术后7 d时CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均较术后24 h时升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表3 4项免疫细胞在TACE患者术前和术后变化情况

注：与术前相比，*P<0.05；与术后24 h相比，#P<0.05。

表4 4项免疫细胞在RFA患者术前和术后变化情况

注：与术前相比，*P<0.05；与术后24 h相比，#P<0.05。

2.4 4项免疫细胞在RFA患者术前和术后变化情况 见表4。RFA患者小肝癌组术后24 h时CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+与术前差异均无统计学意义(P>0.05)，术后7 d时CD4+和CD4+/CD8+均较术前升高，但CD8+降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；大肝癌组患者术后24 h时CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均较术前降低，术后7 d时CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均较术前升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.5 TACE组和RFA组患者不同时间点CD4+/CD8+变化情况比较 TACE组小肝癌患者术后CD4+/CD8+呈下降趋势，RFA组小肝癌患者术后CD4+/CD8+呈上升趋势，术后7 d时RFA组高于TACE组，差异有统计学意义(P<0.05)，见图1；TACE组和RFA组大肝癌患者术后CD4+/CD8+均呈先下降后上升趋势，术后7 d时RFA组高于TACE组，差异有统计学意义(P<0.05)，见图2。

图1 TACE组和RFA组患者小肝癌组不同时间点CD4+/CD8+变化情况

图2 TACE组和RFA组患者大肝癌组不同时间点CD4+/CD8+变化情况

3 讨 论

近年来，随着微创治疗技术的普及和发展，介入治疗逐渐被应用于肝细胞肝癌的治疗，其中TACE和RFA是比较常用的介入治疗方式。有研究指出，在早期肝癌和小肝癌治疗中TACE和RFA均可获得较好的临床效果[6]。肝脏作为机体最大的免疫器官，在机体免疫中发挥重要作用[7]。在肝癌发生、进展过程中会释放大量的肿瘤移植因子，对机体免疫功能产生抑制作用[8]。TACE和RFA治疗方式是否会对机体免疫功能产生影响尚无定论。有研究指出，TACE治疗中栓塞了癌组织供血动脉，导致癌细胞坏死，从而有效减少对免疫功能的影响[9]。也有研究指出，行介入治疗的患者大多已处于中、晚期，在行栓塞治疗过程中会对正常肝组织造成损伤，进而导致免疫功能进一步下降[10]。亦有研究指出，RFA有利于增强机体免疫功能[11]。本研究中对TACE和RFA治疗后患者免疫细胞变化情况进行了分析，并比较了两种方法对免疫功能的影响。

本研究中TACE组和RFA组患者一般情况差异均无统计学意义(P>0.05)，从而排除了一般情况对研究结果的影响。同时，本研究中，根据肿瘤直径情况进行分组分析，结果显示，无论TACE组还是RFA组患者，小肝癌组患者ALT、AST、ALB和TBIL 手术前、后差异均无统计学意义(P>0.05)，说明对于直径小于或等于5 cm的小肝癌，TACE和RFA治疗对肝功能影响较小，效果相当[12]。对于大肝癌患者，TACE组ALT、AST和TBIL术后均高于术前，而ALB低于术前，差异有统计学意义(P<0.05)；RFA组患者术后ALT高于术前，而AST低于术前，差异均有统计学意义(P<0.05)，说明对于大肝癌患者的介入治疗，TACE组和RFA组治疗后都会对患者肝功能产生一定的影响，整体上RFA的影响要小于TACE。在肿瘤的发生、进展及预后中，机体免疫功能发挥重要作用，尤其是T细胞在抗肿瘤免疫中意义重大[13]。CD3+、CD4+和CD8+是比较重要的T细胞亚群，对维持细胞免疫稳态具有重要作用，CD3+水平主要反映外周血成熟T细胞水平，CD4+在辅助免疫中发挥重要作用，CD8+主要发挥免疫抑制作用，CD4+/ CD8+可反映细胞免疫稳定状态，在判别疾病严重程度及预后中具有重要意义[14]。本研究结果显示，对于小肝癌患者，无论是TACE组还是RFA组，术后24 h时CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+差异均无统计学意义(P>0.05)，而术后7 d时，TACE组患者CD4+和CD4+/CD8+均较术前减少，差异有统计学意义(P<0.05)，RFA组患者CD4+和CD4+/CD8+均较术前升高，但CD8+降低，差异有统计学意义(P<0.05)，说明对于小肝癌患者，RFA对患者T细胞亚群影响较小。对于大肝癌患者，TACE组患者术后24 h时和术后7 d时CD4+和CD4+/CD8+均较术前降低，差异均有统计学意义(P<0.05)，且术后7 d时CD4+和CD4+/CD8+均较术后24 h时升高，差异有统计学意义(P<0.05)，说明TACE和RFA治疗对大肝癌患者T细胞亚群影响较大，同时，无论大肝癌还是小肝癌组，术后7 d时RFA组均高于TACE组，差异有统计学意义(P<0.05)，提示RFA对肝癌患者T细胞亚群的影响整体小于TACE。分析原因：RFA治疗会引发肿瘤变性坏死，有利于消除肿瘤免疫抑制因子释放，从而缓解免疫抑制；坏死的肿瘤细胞有利于增强免疫源性，刺激机体免疫功能；同时，加热的过程会导致非特异性炎性反应，而高温热疗又能够刺激热休克蛋白产生及增加P53稳定性，从而在加强特异性免疫的同时，促进了肿瘤细胞的凋亡[15]。

综上所述，在单纯进行TACE或RFA治疗肝癌时，RFA相对对患者肝功能的影响较小，无论是TACE还是RFA均会对患者免疫功能产生影响。RFA更有利于患者术后免疫功能恢复，在诸多影响因素中，肿瘤大小在介入治疗对肝功能及细胞免疫的影响中意义重大。由于本研究是初步的观察性研究，且标本量相对较少，下一步将针对介入治疗对细胞免疫影响的可能机制进行研究，以进一步完善介入治疗方案。

[1]俞顺章,郑莹,吴春晓,等.上海市肝细胞癌防治40年[J].中华流行病学杂志,2013,34(6):637-641.

[2]林介军,吴伟,蒋晓芬,等.射频消融联合肝动脉化疗栓塞治疗原发性肝癌的临床疗效[J].中华肿瘤杂志,2013,35(2):144-147.

[3]Iezzi R,Cesario V,Siciliani L,et al.Single-step multimodal locoregional treatment for unresectable hepatocellular carcinoma:balloon-occluded percutaneous radiofrequency thermal ablation (BO-RFA) plus transcatheter arterial chemoembolization (TACE)[J].Radiol Med,2013,118(4):555-569.

[4]Seto WK,Chan TS,Hwang YY,et al.Hepatitis B reactivation in patients with previous hepatitis B virus exposure undergoing rituximab-containing chemotherapy for lymphoma:a prospective study[J].J Clin Oncol,2014,32(33):3736-3743.

[5]Perrillo RP.Reactivated hepatitis B due to medical interventions:the clinical spectrum expands[J].Antivir Ther,2011,16(7):947-949.

[6]Ni JY,Liu SS,Xu LF,et al.Meta-analysis of radiofrequency ablation in combination with transarterial chemoembolization for hepatocellular carcinoma[J].World J Gastroenterol,2013,19(24):3872-3882.

[7]Chopra SS,Haacke N,Meisel C,et al.Postoperative immunosuppression after open and laparoscopic liver resection:assessment of cellular immune function and monocytic HLA-DR expression[J].JSLS,2013,17(4):615-621.

[8]Sun Y,Xi D,Ding W,et al.Soluble FGL2,a novel effector molecule of activated hepatic stellate cells,regulates T-cell function in cirrhotic patients with hepatocellular carcinoma[J].Hepatol Int,2014,8(4):567-575.

[9]陈汉广,王良盟,刘新.复方丹参滴丸联合阿德福韦酯对肝癌TACE术后疗效及免疫功能影响[J].中国药师,2014,17(7):1168-1170.

[10]张剑,吴敏,张自森,等.养正消积胶囊对原发性肝癌肝动脉化疗栓塞术后患者细胞免疫功能及血管形成的影响[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(13):189-192.

[11]王健琳,刘颖.超声引导射频消融治疗原发性及继发性肝癌对免疫功能的影响[J].重庆医学,2013,42(26):3097-3099.

[12]倪嘉延,孙宏亮,骆江红,等.经皮穿刺射频消融治疗原发性肝癌随机对照试验Meta分析[J].中华肿瘤防治杂志,2014,21(9):711-717.

[13]Duraiswamy J,Freeman GJ,Coukos G.Therapeutic PD-1 pathway blockade augments with other modalities of immunotherapy T-cell function to prevent immune decline in ovarian cancer[J].Cancer Res,2013,73(23):6900-6912.

[14]Rathore AS,Kumar S,Konwar R,et al.CD3+,CD4+& CD8+tumour infiltrating lymphocytes (TILs) are predictors of favourable survival outcome in infiltrating ductal carcinoma of breast[J].Indian J Med Res,2014,140(3):361-369.

[15]Ma H,Zhang Y,Wang Q,et al.Therapeutic safety and effects of adjuvant autologous RetroNectin activated killer cell immunotherapy for patients with primary hepatocellular carcinoma after radiofrequency ablation[J].Cancer Biol Ther,2010,9(11):903-907.

Influence of TACE and RFA on immune function in treatment of hepatocellular carcinoma

WANGYan，TIANRong-hua△

(DepartmentofMRI,XiaoganCentralHospital,Xiaogan,Hubei432000,China)

Objective To investigate the influence of transcatheter arterial chemoembolization (TACE) and radiofrequency ablation (RFA) on immune function in treatment of hepatocellular carcinoma (HCC).Methods 84 cases of patients with HBV-related HCC were divided into TACE group (n=52) and RFA group (n=32) according to interventional treatment.In TACE group,there were 18 cases of large size HCC (tumor diameter >5 cm) and 34 cases of small size HCC (tumor diameter ≤5 cm).In RFA group,there were 15 cases of large size HCC and 17 cases of small size HCC.The immune cell subsets were detected by using FACS Calibur flow cytometer respectively before surgery,24 h and 7 d after surgery.Results 7 d after surgery,CD4+and CD4+/CD8+of patients with small size HCC in TACE group significantly reduced comparing with their preoperative data (P<0.05),while CD4+and CD4+/CD8+of patiens with small size HCC in RFA group were elevated comparing with their preoperative data,but CD8+reduced,with statistical differences (P<0.05).24 h and 7 d after surgery,CD3+,CD4+and CD4+/CD8+of patients with large size HCC in TACE group significantly reduced comparing with their preoperative data,and those were significantly higher at 7 d after surgery than 24 h after surgery,with statistical differences (P<0.05).In RFA group,CD3+,CD4+and CD4+/CD8+of patients with large size HCC reduced at 24 h after surgery,and increased at 7 d after surgery,comparing with the preoperative data (P<0.05).7 d after surgery,CD4+/CD8+of large and small size HCC patients in RFA group were significantly higher than TACE group (P<0.05).Conclusion Whether TACE or RFA would affect the immune function in HCC patients.RFA had less impact on postoperative liver function and was conducive to the recovery of immune function.

hepatocellular carcinoma; TACE; RFA; cellular immunity

王艳，女，本科，主管技师，主要从事普通放射、乳腺钼靶、介入、CT、MRI研究。△

，E-mail：tianrh9999@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.036

A

1672-9455(2015)24-3705-04

2015-05-25

2015-08-26)