禽呼肠孤病毒σ B蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

陈 祥，吴海洋，王永强，李晓齐，曹 红，郑世军

（中国农业大学动物医学院 农业生物技术国家重点实验室，北京 海淀 100193）

禽呼肠孤病毒（Avian reovirus，ARV）属于呼肠孤病毒科，正呼肠孤病毒属[1]，于1954 年最早从鸡体内分离得到[2]，20 世纪80 年代中期我国也出现了此病的报道[3]。ARV可以引起关节炎、腱鞘炎、肉鸡发育迟缓综合征（RSS）、呼吸障碍综合征（MAS），以及呼吸系统疾病等[4-5]，给养禽业造成巨大经济损失。

ARV无囊膜，有双层衣壳，属于双股RNA（dsRNA）病毒[6]。病毒含有10 个双股RNA片段，这些片段至少编码10 个结构蛋白和4 个非结构蛋白[7]。

σB蛋白是由S3 片段编码，包含367 个氨基酸，是病毒粒子外衣壳的重要组成部分[8]，该蛋白分别在N末端和C末端存在一个功能上相互独立的基序，即N末端的锌指基序，C末端的核苷酸结合基序[9]。σB蛋白携带有病毒型特异性中和反应的表面抗原，能诱导宿主产生群特异性中和抗体[10]。本研究成功表达了σB重组蛋白并制备出针对它的单克隆抗体，为进一步研究ARV的致病机理奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 菌株、质粒、病毒、细胞与实验动物 sp2/0 细胞、DF-1 细胞、DH5α、BL21、质粒pGEX-6P-1、pET-28a、已纯化的His-VP2 和GST-VP2 蛋白由本实验室保存等均由本实验室（中国农业大学动物医学院免疫生物学实验室）保存；ARVS1133 毒株由中国农业大学人畜共患病研究室苏敬良老师惠赠；6～8 周龄雌性BALB/c 小鼠，购自中国医学科学院实验动物研究所。

1.2 仪器及主要试剂 HAT、HT、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂和Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Reagents，均购自Sigma公司；胎牛血清，购自HyClone公司；DMEM高糖培养基，购自Gibco 公司；PEG4000，购自Merck 公司；HRP 标记山羊抗小鼠IgG，购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；……