CODEHOP法设计引物克隆中华绒螯蟹5-ht1和5-ht2受体基因片段及序列分析

徐泽文， 杨筱珍， 黄 坚， 李 彤， 杨志刚， 王 春， 成永旭

(上海海洋大学 水产种质资源发掘与利用教育部重点试验室，上海 201306)

CODEHOP法设计引物克隆中华绒螯蟹5-ht1和5-ht2受体基因片段及序列分析

徐泽文， 杨筱珍， 黄 坚， 李 彤， 杨志刚， 王 春， 成永旭

(上海海洋大学 水产种质资源发掘与利用教育部重点试验室，上海 201306)

根据已报道的中华绒螯蟹近缘物种的5-ht1r和5-ht2r氨基酸序列保守区，利用CODEHOP设计了两对简并引物，采用RT-PCR法扩增得到了中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r部分片段并克隆到pMD-19T载体。测序结果表明扩增到的中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r片段长分别为366 bp和177 bp，编码121和58个氨基酸。经BLASTp分析显示，中华绒螯蟹5-ht1r与罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)和克氏原螯虾(Procambarusclarkii)的5-ht1r同源性高达98%，而中华绒螯蟹5-HT2R与断沟龙虾(Panulirusinterruptus)和克氏原螯虾(Procambarusclarkii)5-ht2r同源性高达95%。

CODEHOP；中华绒螯蟹；5-ht1r；5-ht2r；克隆

在十足目甲壳类动物中，所有机体器官系统受到神经系统和内分泌系统的综合调控。神经内分泌系统控制着机体蜕皮、生长和性成熟等多种生理过程，而神经激素的合成与释放受到生物胺的调节[1-2]。5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine, 5-HT)作为一种单胺类神经递质，其普遍存在于脊椎动物和无脊椎动物当中，通过影响神经内分泌系统中神经激素的合成与释放能够间接对多种生理作用和行为进行调控[3-5]。有研究报道5-HT能够刺激副交感神经进而诱导未孕家兔(Oryctolaguscuniculus)的子宫收缩[6]；对欧洲黑蜂(Apismelliferamellifera)的研究发现5-HT可以抑制其进食，刺激肠道肌肉收缩对其消化产生影响[7]；将罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)幼体浸泡于一定浓度的5-HT后，促进了其生长以及体色的形成[8]。……