血清白介素－1β和干扰素－γ对脊柱结核的诊断价值

王玲玲张国良(深圳市第三人民医院　广东深圳　518000)

血清白介素－1β和干扰素－γ对脊柱结核的诊断价值

王玲玲张国良
(深圳市第三人民医院广东深圳518000)

【摘要】目的探讨血清中白介素－1β(IL－1β)和干扰素(IFN－γ)检测在脊柱结核诊断中的价值。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测38例脊柱结核患者和40例健康人血清中IL－1β和IFN－γ的水平。结果脊柱结核组血清中IL－1β和IFN－γ表达水平均明显高于健康对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论血清IL－1β和IFN－γ检测有助于脊柱结核患者的早期诊断。

【关键词】脊柱结核;白介素－1β;干扰素－γ;诊断

脊柱结核多起病隐匿，进展缓慢，患者早期临床症状不明显，易造成临床漏诊或误诊，成为致残的主要原因，严重影响生活质量［1］。在临床工作中，及早诊断、尽早抗痨治疗、及时手术干预能促进患者快速康复［2］。目前细菌学检查是脊柱结核的实验室诊断金标准，但培养周期长、过程繁琐，使其不能作为早期、快速诊断方法。酶联免疫法(ELISA)是目前酶免疫测定技术中应用最为广泛的方法之一，已经在国内外用于结核病的临床研究。此次采用该方法检测脊柱结核患者和健康志愿者血清中白介素－1β(IL－1β)以及干扰素－γ(IFN－γ)的表达，探讨IL－1β和IFN－γ对于脊柱结核早期诊断的意义。

1　资料与方法

1.1一般资料以2011年2月至2013年2月在深圳市第三人民医院确诊为脊柱结核的患者38例作为研究对象。纳入标准:①病灶组织标本病理检查确诊为结核改变;②术前或术中活检，病灶标本培养出结核分枝杆菌;③脊柱结核患者抗痨治疗3周内;④经细菌培养鉴定，除外非结核分枝杆菌感染。排除标准:①艾滋病抗体携带者;②年龄＜14周岁。其中男性20例，女性18例，平均45.2岁(25～66岁);发病部位:颈椎3例，胸椎16例，腰椎17例，骶椎2例。同时随机选取健康志愿者40例作为对照，其中男性20例，女性20例，平均44.8岁(26～60岁);两组患者年龄、性别等一般资料比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2研究方法两组患者均于晨起空腹采集静脉血5 ml，1 000 r/min离心5 min，分离血清，－80℃冰箱冷冻保存，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IFN－γ 和IL－1β浓度，严格按照检测试剂盒说明书操作，试剂盒购自美国R＆D公司。主要步骤:选取包被IFN－γ和IL－1β抗体的酶标板，室温平衡，然后加入外周血清100 μl，37℃孵育2 h，PBS洗涤3次，再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗，37℃孵育1 h，PBS洗涤3次，加入底物四甲基联苯胺(TMB)进行显色，利用Beckman公司DTX－880酶标仪检测OD 450 nm，根据标准品绘制标准曲线并计算样品的细胞因子浓度。

1.3统计学方法采用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理分析，定量资料以(±s)表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

脊柱结核组血清IL－1β及IFN－γ水平明显高于健康对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

表1　两组血清IL－1β和IFN－γ水平比较(±s，pg/ml)

组别　n　IL－1β　IFN－γ脊柱结核组38　9.23±3.16　 53.64±23.32健康对照组40　3.52±2.41　 25.58±14.65

3　讨论

根据世界卫生组织统计结果，全球每年结核病新发病例约800万人，最少300万人死于该病。我国近年结核病发病率有逐年上升的趋势，每年新增结核患者约150万人。脊柱结核又名Pott病，是脊柱椎体感染结核杆菌后形成的一种破坏性骨关节疾病。该病发病率在骨与关节结核中最高［3］。在成年患者中，以腰椎结核最为常见，胸椎结核次之，颈椎、骶椎结核相对少见。由于该病病程较长，发展速度缓慢，表现为发病部位疼痛、肌肉痉挛、活动受限。严重者可以导致脊柱塌陷、变形、椎管狭窄，从而引起脊髓、神经根的压迫，最终导致截瘫及肢体功能丧失。在临床上常常误诊为椎间盘突出、脊柱肿瘤、强直性脊柱炎等疾病。在诊断方面，典型病例及中晚期患者不难诊断。对于早期患者，由于症状轻微，体征较少，即使放射学检查，也很难确诊。

目前临床工作中，脊柱结核的诊断主要依据临床表现、影像学检查以及病理学检查。而细菌学检查周期较长，约需4～8周，患者往往已经出院还尚未得到检测结果。在实验室检查中，红细胞沉降率的检测，在结核发病早期具有较高的临床意义，但不具有特异性。而结核抗体的测定，虽然特异性较高，但缺乏较高的敏感性［4］。PPD试验属于体外试验，对检查结果判别常常受观察者主观因素影响。在结核病高发地区，随着卡介苗预防接种的普及，假阳性增多。PPD试验结果也会受机体免疫状态等多种因素影响，使其在结核的诊断中灵敏度及特异性均较低［5］。

酶联免疫法的原理是采用抗原与抗体的特异反应，将待测标本与酶连接，通过酶与底物产生的颜色反应，用于定量测定。白细胞介素1(IL－1)属于前炎性细胞因子，曾被称为淋巴细胞因子。主要由单核或巨噬细胞、中性粒细胞以及内皮细胞分泌，能诱导激活多种免疫和炎症细胞，其本身具有多种生物学功能。人体内IL－1活性基本由IL－1β介导，IL－1β能通过自分泌或者旁分泌刺激其他细胞因子以及炎症递质的产生，为T淋巴细胞激活提供第二信号，促进B细胞的增殖、分化，介导免疫球蛋白的分泌。由此激活补体，增强细胞免疫和体液免疫介导的组织损伤过程［6］。结核杆菌属于细胞内致病菌，主要寄生在单核巨噬细胞中。当罹患脊柱结核时，结核菌抗原刺激单核巨噬细胞产生高水平的IL－1β，从而激活上述机制，引起组织损伤及一系列的结核病理改变［7］。

干扰素是一组以糖蛋白为主的多种功能活性蛋白质，因为干扰病毒复制而得名。依据产生细胞的不同分为α干扰素、β干扰素以及γ干扰素3类。γ干扰素(IFN－γ)可以调节与免疫相关基因的转录，从而协调机体的免疫反应，是机体内非常重要的细胞因子。当机体罹患结核菌感染时，免疫应答系统会被激活。而结核菌的感染，导致特异性中央型记忆细胞、效应型记忆细胞在体内较长期存在。在反复受到抗原刺激时迅速增殖，大量释放γ－干扰素［8－9〗。国外研制的结核杆菌抗原特异性γ干扰素释放试验试剂盒，正是利用这一原理，检测结核杆菌特异的效应T淋巴细胞，用于结核杆菌感染的辅助诊断。目前已经取得了较好的临床应用效果［10］。

综上所述，当机体罹患脊柱结核时，血清中白介素－1β(IL－1β)和干扰素－γ(IFN－γ)的水平明显高于正常人，说明IL－1β和IFN－γ参与了脊柱结核的免疫应答。通过检测二者的血清水平变化，对脊柱结核的早期诊断具有一定的指导意义。

参考文献

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The diagnostic value of serum IL－1β and IFN－γ in patients with spinal tuberculosis

Wang Lingling，Zhang Guoliang
(The Third People’s Hospital of Shenzhen City，Shenzhen 51800，China)

【Abstract】Objective To investigate the diagnostic value of serum IL－1β and IFN－γ in patients with spinal tuberculosis.Methods The serum IL－1β and IFN－γ levels in 38 patients with spinal tuberculosis and 40 healthy controls were detected by ELISA.Results Spinal tuberculosis group，serum levels of IL－1β and IFN－γ expression were significantly higher than the control group，and the differences were statistically significant(P＜0.05).Conclusion Detection of serum IL－1β and IFN－γ levels may be helpful in early diagnosing of spinal tuberculosis.

【Key words】spinal tuberculosis; IL－1β; IFN－γ; diagnosis

(收稿日期:2015－02－16)

基金项目:广东省自然科学基金课题(408068628042)。

doi:10.3969/j.issn.1004－437X.2015.06.006

【中图分类号】R 446.6