HPLC法测定解毒止痛颗粒中连翘苷的含量

廖 然 谢 伟 南华大学附属南华医院药剂科(衡阳421000)

HPLC法测定解毒止痛颗粒中连翘苷的含量

廖 然 谢 伟△南华大学附属南华医院药剂科(衡阳421000)

目的:建立解毒止痛颗粒中君药连翘的有效成分含量。方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(23：77)为流动相，检测波长为230nm。结果: 连翘苷浓度在26.9～134.5μg/mL范围内，样品的峰面积与浓度呈良好的线性关系；测定回收率、重复性和中间精密度均良好；各批供试品的含量均在标示量的95%～105%范围内。结论:本方法操作简便,精密度好,结果准确可靠,可用于该产品的质量控制。

解毒止痛颗粒是由连翘、金银花、栀子等12味中草药配伍组成，方中重用连翘为君药，药用功效为解毒止痛，主要用于治疗风热之邪侵入人体引起的咽喉肿痛，目赤、牙龈红肿等症，预试验中具有非常显效的治疗作用。本文采用HPLC法测定所述中药制剂中君药所含有效成分连翘苷的含量，以期为该产品的质量控制提供一定依据。

1 仪器与试药 1.1 仪 器 Waters 2695高效液相色谱仪，Empower色谱工作站，2996二极管阵列检测器；HB3120U型数控超声波发生器；Sartorius BT125D电子天平。

1.2 试 药 连翘苷对照品(由中国食品药品检定研究院提供)；解毒止痛颗粒及缺连翘阴性样品(实验室自制)；乙腈、甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为高纯水。

2 方法与结果[1-5]2.1 色谱条件的确定

2.1.1检测波长选择： 取连翘苷适量，用甲醇溶解并逐步稀释，按《中国药典》2010年版一部附录项下紫外分光光度法，于200～400nm波长范围内扫描。结果：连翘苷在230nm处有最大吸收，因此，选择230nm作为本有效成分的检测波长。

2.1.2色谱条件与系统适用性试验： 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-水(23：77)为流动相，检测波长为230nm，流速1.0mL/min；柱温30℃；理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。结果：在本色谱条件下，连翘苷色谱峰出峰时间适宜，峰形良好，与相邻杂质峰均能良好分离。

2.2 含量测定 2.2.1 溶液的配制：2.2.1.1对照品溶液的制备：精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得对照品溶液。

2.2.1.2供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品5片，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25mL，蒸干，用水30mL分次溶解，加于已处理好的D101大孔树脂柱(内径1.5 cm，长20cm)上，以每分钟约3～4mL的流速，用水80mL洗脱，弃去洗脱液，再用30%甲醇100mL洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，移置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.2.2专属性考察：照处方、工艺制备缺连翘药材的阴性样品，并取试验样品1.0g，同上述“2.2.1.2”项下供试品溶液的制备方法制备缺连翘阴性样品溶液。

精密吸取阴性样品溶液、对照品溶液、供试品溶液各10μL，按上述确定的色谱条件进行分析。结果表明阴性样品对连翘苷测定无干扰，供试品色谱中连翘苷色谱峰与周围峰分离度良好。

2.2.3线性关系：取连翘苷约20mg，精密称定，置50mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释到刻度，摇匀。量取1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、9.0mL，分别置于25mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积A为纵坐标，以浓度C(μg/mL)为横坐标，计算回归方程。结果：回归方程为A =56700C+12699，R=0.9998，表明连翘苷浓度在26.9～134.5μg/mL范围内线性关系良好。

2.2.4回收率试验：取已知含量的本品内容物适量，称取6份，每份约0.2g，精密称定，加入一定量的连翘苷对照品溶液，分别使得连翘苷的加入量为已知含量供试品中连翘苷含量的75%、100%和125%，置于锥形瓶中，按既定方法制样、测定，计算回收率。结果连翘苷的平均回收率为99.57%，相对标准偏差为0.8%，符合要求。结果见表1。

2.2.5测定重复性：取本品，按含量测定方法配制供试品溶液。精密量取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。连续测定6次，计算含量及其相对标准偏差。结果：平均含量为100.1%，RSD=0.21%，表明本方法重复性良好。

表1 连翘苷加样回收率试验结果

2.2.6中间精密度：取6批样品，在不同日期，由不同分析人员，照含量测定方法测定含量，考察方法的精密度。结果：平均含量为100.5%，RSD=0.49%，表明该方法精密度良好。

2.2.7溶液稳定性：取本品，按含量测定方法配制供试品溶液。分别在室温条件下于第0、1、2、4、8、10h，各精密量取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算各时间点的含量。结果：本品含量随时间增加而降低，但在8个h内基本稳定，因此，含量测定时供试品溶液临测前配制。

2.2.8供试品含量测定：取本品3批，按含量测定方法测定，结果：三批供试品的含量均在标示量的95.0%～105.0%范围内，符合相关标准要求。

3 讨 论 笔者在建立连翘苷的含量检测方法中，着重考察了色谱柱、流动相、pH值、流速、温度等参数对测定结果的稳定性、精密性影响，最终优选出的HPLC方法灵敏、准确、专属性强，有效成分连翘苷浓度在26.9～134.5μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，此方法操作简便，可行，精密度高。

此外，笔者还曾尝试对连翘、金银花、栀子等药物中的有效成分建立“一测多评”的质量监控、评价方法，然由于试验方法的稳定性及其精密性尚需进一步优选，因此，文中未曾提及，此后将进一步探索研究。

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(收稿2014-08-27；修回2014-10-09)

连翘苷/分析 色谱法，高压液相 @解毒止痛颗粒

R284

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.01.053

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