酸枣仁汤对睡眠剥夺大鼠认知功能及海马NA，GABA，5-HT的影响*

杨 波 岳 明 陕西省咸阳市中心医院(咸阳 712000)

酸枣仁汤对睡眠剥夺大鼠认知功能及海马NA，GABA，5-HT的影响*

杨 波 岳 明 陕西省咸阳市中心医院(咸阳 712000)

目的：观察复方酸枣仁汤(SZRT)对睡眠剥夺(SD)大鼠认知功能及海马NA，GABA，5-HT含量的影响。方法：行为学筛选合格的雄性大鼠50只分为对照组、睡眠剥夺组、酸枣仁汤(SZRT)21.0g/kg，10.50g/kg，5.25 g/kg剂量组，建立睡眠剥夺大鼠动物模型，进行7d连续睡眠剥夺，1d1次，Y-型电迷宫测定学习记忆，Elisa法检测海马中去甲肾上腺素(NA)，γ-氨基丁酸(GABA)，5-羟色胺(5-HT) 的含量。结果：与睡眠剥夺组相比，SZRT 21.0g/kg组大鼠的学习记忆的能力改善，NA的含量降低，GABA和5-HT 含量升高。结论：酸枣仁汤(SZRT)可改善睡眠剥夺大鼠认知功能，与改变单胺类递质作用有关。

睡眠和觉醒是人类所必须的生理现象，睡眠是恢复精力体力所必须的休息。睡眠剥夺(sleep deprivation，SD)由于自身生理、病理因素或环境的影响而丧失了生理所需要的睡眠，睡眠剥夺可导致机体认知功能的损害[1]。酸枣仁汤出自张仲景的《金匮要略》，具有养心安神等功效，广泛用于治疗心悸、失眠、焦虑等。本课题考察复方酸枣仁汤(SZRT)对睡眠剥夺模型大鼠认知功能的影响。

1 材 料

1.1 药物及试剂 酸枣仁汤(SZRT)水煎剂由陕西中医学院中药药理研究室(三级实验室)制备。去甲肾上腺素(NA)，γ-氨基丁酸(GABA)，5-羟色胺(5-HT) Elisa 试剂盒(上海森雄科技实业有限公司)。

1.2 动 物 Sprague Dawley大鼠，SPF级，体质量250～270g，♂。购于西安交通大学医学院实验动物中心，动物质量许可证号：SCXK(陕)2007-001。

1.3 仪 器 睡眠剥夺箱(自制)，Y-迷宫(张家港市生物仪器厂)。电动玻璃匀浆器(上海康华生化仪器)，KDC-160HR高速冷冻离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)。

2 方 法

2.1 分组和造模[2]釆用改良多平台法造模，成年♂大鼠70只，体质量250±20g，2月龄。适应性喂养1周，经过站水平台训练及Y-电迷宫的筛选，选出合格大鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，对照组、睡眠剥夺组、酸枣仁汤(SZRT)21.0g/kg，10.50g/kg，5.25 g/kg剂量组。连续7d进行睡眠剥夺，在睡眠剥夺箱(长90cm×宽70cm×高50cm)中放置10个小平台(直径6.5cm，高8.0cm)，平台之间距离15cm，平台周边注满水，水面距平台面约1.0 cm，水温20～22℃，每天更换水1次，大鼠在平台上可饮食饮水，如果入睡就会落入水中，大鼠只能爬上平台，这样反复多次可达到睡眠剥夺的效果。对照组采用大平台(直径12cm，高8.0cm)作为对照，大鼠可以在大平台上睡眠，入睡不会落入水中，其它环境与其余SD组相同。

2.2 给 药 酸枣仁汤(SZRT)水煎液21.0g/kg，10.5g/kg，5.25g/kg组，给药体积为l0mL/kg，给药一周。对照组和睡眠剥夺组灌胃等容积的去离子水。

2.3 指标检测

2.3.1 Y-迷宫实验[3]实验步骤：先将大鼠放入迷宫中适应3～5min，再开始正式实验。测试在第0d、7d进行。采用随机不休息法[4]：安全区以无规则的次序变换。开始时，对动物所在支臂与另一支臂通电，动物在电击下逃窜至灯光区后再保持10s或30s为一次测试。然后以动物所在支臂为下次测试的起始位置进行下一次测试。观察指标：①错误反应次数：每个实验日进行20次训练测试，统计错误反应的次数。②主动回避率(%)：大鼠在灯亮后但未通电的5s内完成逃避反应的次数占总反应次数的百分率。安全区灯亮，电刺激尚未开始时，大鼠即逃往安全区表明大鼠已经形成了明暗辨别条件反射，称为主动回避反应。

2.3.2 海马神经递质测定：将学习记忆测试结束后的各组大鼠，断头取海马组织，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重后，加入冷生理盐水，于匀浆管中充分研碎，制成10%的脑匀浆，以3000r·min-1离心15min取上清液，Elisa测定海马组织匀浆中去甲肾上腺素(NA)，γ-氨基丁酸(GABA)，5-羟色胺(5-HT)含量，结果见表2。

3 结 果 3.1 对睡眠剥夺大鼠Y迷宫实验的影响 造模前各组大鼠的错误反应次数和主动回避率基本一致，无显著性差异(P>0.05)。造模第7d，与大平台对照组比较，睡眠剥夺组错误次数明显增多，主动回避率明显减少，有显著性差异(P<0.01)，与睡眠剥夺组相比，SZRT大剂量组错误次数明显减少，主动回避率增多，有显著性差异(P<0.05，P<0.01)。结果见表1。

表1 SZRT对睡眠剥夺大鼠Y-迷宫实验的影响

注：与对照组比较△P<0.05，▲P<0.01；与睡眠剥夺组比较◇P<0.05，◆P<0.01

3.2 SZRT对睡眠剥夺大鼠海马海马NA，GABA，5-HT含量的影响 与对照组比，睡眠剥夺组的海马NA含量显著升高，GABA，GABA含量显著降低，有显著性差异(P< 0.05，P< 0.01)。与睡眠剥夺组比较，酸枣仁汤21.0g/kg剂量组海马的NA降低，5-HT，GABA活性升高，有显著性差异(P<0.05)(见表2)。

表2 SZRT对睡眠剥夺大鼠海马单胺类递质的影响

注：与对照组比较△P<0.05，▲P<0.01；与睡眠剥夺组比较◇P<0.05，◆P<0.01

4 讨 论 睡眠剥夺会引起脑内神经递质发生一系列紊乱，影响认知功能。与睡眠关系最大的神经递质分别是5-HT，GABA以及NE。目前一般采用中枢兴奋剂咖啡因等来对抗睡眠剥夺，但该类药物较易产生依赖性和成瘾性，从而限制了临床使用。近年来多用中药来干预睡眠剥夺的研究，由于其作用较持久，毒副作用较少，因此具有较好的应用前景。为了能够复制出与人类睡眠剥夺状态接近的动物模型，我们采用了改良多平台法制作大鼠快动眼睡眠剥夺模型，以酸枣仁汤进行干预。酸枣仁汤方中，酸枣仁重用，其养肝血，安心神，使血不虚，则阴能涵阳为君药，并以之为名，其功效毋庸置疑。茯苓健脾利湿，使三焦无阻，则阳能入阴，且宁心安神，助酸枣仁以安神。知母滋阴，清热除烦，使心神得安，与茯苓共为臣药，与君药枣仁相配，以助君药安神除烦之效。川芎条畅气血，疏达肝气，与酸枣仁相伍，一酸收，一辛散相反相成，以养血调肝安神，为佐药。甘草清热和药，诸药和用，共奏养血安神，清热除烦之效，为佐使[5]。综上所述，酸枣仁汤可改善睡眠剥夺大鼠学习记忆，可能与改变单胺类递质的含量有关，然而确切机制仍需进一步探讨。

[1] Giam GCK．Effeets of sleep deprivation with reference to military operations[J]．Annimals Academy of MedieiNA， 1997，26(1)：88-93.

[2] 范新六，李 峰，宋月晗，等．加味四逆散对睡眠剥夺大鼠PFC和海马CA3区NMDA受体表达的调节作用[J]．世界中医药，2012，7(3)：261-262.

[3] 王跃春．Y-型电迷宫在大鼠学习记忆功能测试中的合理运用[J]．中国行为医学科学，2005，14(1)：69．

[4] 王跃春．大鼠Y-型迷宫测试法的筛选与优化[J]．中国行为医学科学，2005，14(1)：50．

[5] Corelli C．How sleep deprivation affects geNA expression in the brain：a review of recent findings[J]．J Appl Physiol，2002，92(1)：394-400．

(收稿2014-09-23；修回2014-10-11)

Suanzaoren decoction on the cognitive function and NA，GABA，

5-HT in hippocampus on sleep deprived rats

XianYang Central Hospital ( Xianyang 712000) Yang Bo Yue Ming

Objective：To investigate the effects of Suanzaoren Decoction on the cognitive function in sleep deprived rats and the content of NA，GABA，5-HT in hippocampus．Methods：After screening, selection behavior qualified in rats，50 male rats were randomly divided into control group，sleep deprivation group，SZRT 21.0g/kg，10.50g/kg，5.25 g/kg dose group，The models of sleep deprived were established with modified multiple platform method for seven days，drugs were given once daily．Determine the learning and memory of rats by Y-type maze，determine the the content of NA，GABA，5-HT in hippocampus by Elisa．Results：Compared with sleep deprivation group，SZRT 21.0g/kg dose group could improve learning and memory，decrease the content of NA，increase the content GABA，5-HT in hippocampal．Conclusion：Suanzaoren Decoction can improve the learning and memory in rats after sleep deprivation，may be related to change monoamine transmitters.

Sleep Deprivation/traditional Chinese medicine therapy Suanzaoren decoction/therapeutic uses Animal experimentation Rats

*陕西省教育厅科研计划项目资助(2013JK0827)

睡眠剥夺/中医药疗法 酸枣仁汤/治疗应用 动物实验 大鼠

R256.23

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.01.058