6种杀菌剂对牡丹根腐病菌的室内毒力测定

王 桢, 贺春玲,2, 侯小改, 卫志鹏, 何童童, 关云霄, 刘改秀

(1.河南科技大学林学院,河南洛阳 471003;2.河南省高校牡丹工程技术中心，河南洛阳 471003；3.河南科技大学农学院，河南洛阳 471003；4.洛阳土桥花木公司,河南洛阳 471006；5.中国洛阳国家牡丹基因库，河南洛阳 471006)



6种杀菌剂对牡丹根腐病菌的室内毒力测定

王 桢1, 贺春玲1,2, 侯小改2,3, 卫志鹏4, 何童童1, 关云霄1, 刘改秀5

(1.河南科技大学林学院,河南洛阳 471003;2.河南省高校牡丹工程技术中心，河南洛阳 471003；3.河南科技大学农学院，河南洛阳 471003；4.洛阳土桥花木公司,河南洛阳 471006；5.中国洛阳国家牡丹基因库，河南洛阳 471006)

[目的]筛选出牡丹根腐病的有效防治药剂。[方法]在实验室条件下，采用菌丝生长速率法比较分析了6种药剂在10 mg/L质量浓度下对牡丹根腐病的相对抑制率，测定了6种杀菌剂对牡丹根腐病的室内毒力。[结果]在10 mg/L质量浓度下,99%绿亨·恶霉灵可湿性粉剂对牡丹根腐病病原菌的相对抑制率最高，为93.50%；其次是50%多菌灵可湿性粉剂的相对抑制率为89.63%；50%甲锌福美双对牡丹根腐病病原菌的相对抑制率最小，为20.00%。99%绿亨·恶霉灵可湿性粉剂对牡丹根腐病病原菌的毒力最强，EC50为0.002 7 mg/L; 其次是50%多菌灵可湿性粉剂，EC50为0.019 5 mg/L; 复生 甲·锌·福美双可湿性粉剂对牡丹根腐病病原菌的毒力最弱，EC50为19.134 6 mg/L。[结论]为牡丹根腐病大田防治的药剂筛选提供了理论依据。

牡丹根腐病；相对抑制率；毒力测定；杀菌剂

牡丹(Paeoniasuffruricosa)隶属于毛茛科芍药属，为落叶小灌木,是我国的一种名贵花卉[1]。随着牡丹栽植面积的增加和各地的频繁引种，牡丹的病害严重发生，其根部病害主要有根腐病、根结线虫病、白纹羽病、紫纹羽病、根朽病等。其中,根腐病和根结线虫病较严重[2]。牡丹根腐病病原主要为腐皮镰刀菌，也有研究认为是茄病镰刀菌，属于杀生性死体营养的一种真菌[3]。牡丹根腐病一般在3月底出现症状。感病较轻的植株会出现程度不一的矮化，枝条细，叶片小、发黄，发芽迟，花蕾变黄萎缩等症状，严重时可使整株枯死[4]。根腐病的防治方法主要有化学防治和生物防治2种方法[5]。防治牡丹根腐病的主要药剂有“绿亨1号”、甲基托布津、代森锰锌、咪鲜胺乳油、“绿亨2号”、“多福”等[6]。郭敏等采用菌丝生长速率法测定6种杀菌剂对牡丹根腐病的EC50大小为醚菌酯>百菌清>苯醚甲环唑>代森锰锌>多菌灵>咪鲜胺[7]。笔者测定了7种杀菌剂对牡丹根腐病菌的室内毒力，旨在为进一步进行田间防效试验奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试病菌。牡丹根腐病的病原GJ-Ca F7 镰刀菌(图1)是由河南科技大学林学院植保系牡丹病害实验室获得，经活化培养后保存在4 ℃冰箱中，所用培养基为常规PDA培养基。

1.1.2 供试药剂。供试药剂主要分2种类型：可湿性粉剂和可溶性粉剂。可溶性粉剂有50%甲基托布津(山东贵和科技生物有限公司)；可湿性粉剂有75%百菌清(广东省东莞市瑞德丰生物科技有限公司)、50%多菌灵(山东华阳科技股份有限公司)、32%叶斑净(山东济南世王泰生物科技有限公司)、60%博·安托 (北京浩瀚生物科技发展有限公司)、50%甲·锌·福美双(山东市潍坊市瑞星农药有限公司)、50%讯净(山东海讯生物化学有限公司)、20%叶爽(浙江一帆化工有限公司)、80%代森锰锌(新沂中兴有限公司)、65%克得灵(上海佳友化学有限公司)、50%嘧霉多菌灵(北京浩瀚生物科技发展有限公司)、99%绿哼恶·霉灵 (山东省烟台鑫润精细化工有限公司)及80%腈菌唑锰·锌(山市瑞星农药有限公司)。

1.2 试验方法 试验于2012年10月至2014年3月在河南科技大学林学院病害防治实验室进行。供试药剂对病原菌的毒力测定采用菌丝生长速率法。将各供试药剂用无菌水配成含有效成分为10 000 mg/L的母液，再用无菌水配制成5个不同浓度(每个药剂的浓度经预备试验抑制率均在5%～70%)梯度的药液。用移液器分别吸取1 ml药液与9 ml PDA培养基(培养基温度为50 ℃左右)在直径为9 cm的培养皿内混合均匀，制成带药平板培养基，以无菌水作空白对照。将保存好的牡丹根腐病病菌株活化，25 ℃黑暗培养4 d，在培养好的菌落边缘用灭菌的打孔器打取直径为5 mm的菌丝块，分别移到带药平板培养基上，每处理设置3个重复。在25 ℃恒温培养箱中培养，待菌落直径长至培养皿满皿，采用十字交叉法测量菌落直径，计算菌落直径平均值和菌丝生长抑制率。

菌丝生长抑制率=[1-(处理菌落直径-菌饼直径)/(对照菌落直径-菌饼直径)]×100%

1.3 数据处理 将菌丝生长抑制率换算成机率值(y)，药剂浓度换算成浓度对数(x)，按浓度对数与机率值回归法求得线性回归方程：y=a+bx，并以回归方程计算各供试药剂对牡丹根腐病菌的抑制中浓度(EC50)、机率值与浓度对数之间回归的相关系数(r)。

2 结果与分析

2.1 杀菌剂对牡丹根腐病菌的抑制率 13种杀菌剂中有6种药剂对牡丹根腐病的抑菌能力较强，分别为绿亨·恶霉灵、50%多菌灵、嘧霉·多菌灵、75%百菌清、65%克得灵和复生甲锌福美双。相同浓度不同杀菌剂对牡丹根腐病的抑制能力不同，99%绿亨·恶霉灵可湿性粉剂对牡丹根腐病病菌的毒力最强，相对抑制率为93.50%；其次是50%多菌灵可湿性粉剂的相对抑制率为89.63%；50%甲锌福美双对牡丹根腐病病菌的毒力最弱，相对抑制率为20.00%(表1)。

表1 不同药剂(10 mg/L)对牡丹根腐病菌的抑菌活性比较

2.2 杀菌剂对牡丹根腐病菌的毒力测定

2.2.1 供试药剂对牡丹根腐病病菌的抑制率浓度比较。由表2可知，99%绿亨·恶霉灵可湿性粉剂和50%多菌灵可湿性粉剂对牡丹根腐病病菌的EC50值较小，分别为0.002 7和0.019 5 mg/L，表现较敏感，其中99%绿亨·恶霉灵可湿性粉剂对牡丹根腐病的毒力最强，其次是50%多菌灵可湿性粉剂。50%迅净可湿性粉剂对牡丹根腐病的毒力最弱，EC50值为85.225 6 mg/L。

2.2.2 牡丹根腐病菌对供试杀菌剂的敏感性比较。杀菌剂室内毒力测定中EC50越小、斜率越大说明病原菌对药剂的反应灵敏度越高，即随着药剂浓度的增加，抑制率明显增大。但有研究表明回归方程的斜率与病原菌对杀菌剂的敏感性成正比[8-9]。该研究中供试药剂绿亨·恶霉灵、50%多菌灵、嘧霉·多菌灵、75%百菌清、65%克得灵、复生 甲·锌·福美双毒力回归方程的斜率分别为0.425 4、0.411 3、1.141 1、1.070 1、1.979 9、2.308 9(图2)。由此可见，供试药剂回归方程的斜率与病原菌对杀菌剂的敏感性非正相关。其原因还有待田间试验结果进行验证。

表2 6种杀菌剂对牡丹根腐病菌的室内毒力

3 结论与讨论

试验结果表明，6种杀菌剂对牡丹根腐病菌的EC50大小为甲·锌·福美双>克得灵>百菌清>嘧霉·多菌灵>多菌灵>绿亨·恶霉灵，其中以绿亨·恶霉灵对牡丹根腐病菌的菌丝生长抑制作用最强，EC50为0.002 7 mg/L，有明显的抑制效果。

牡丹根腐病是一种土传病害，其防治方法和防治效果受众多因素的影响，此外，长期的化学药物使用造成土壤中的农药残留累积，污染土壤的同时也污染了丹皮药材，从而影响了牡丹的产量[10]。众多研究表明75%代森锰锌可湿性粉、百菌清对牡丹根腐病病菌有很好的抑制作用[11-12]。该研究对牡丹根腐病病菌的室内毒力测定结果表明75%百菌清可湿性粉剂有很好的抑制效果，与易图永等[11-12]的报道相符，同时也为防治不同的病害奠定了基础。但在大田生产中，由于不同病原物发生时间和对杀菌剂的敏感性不同，寄主和环境之间也存在复杂的关系，因此，在大田防效研究中还要注意施药时间和施药量。

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[2] 薛杰，郭霞，马书燕，等.菏泽牡丹主要病害的发生与防治[J].林业实用技术，2005(5)：26-28.

[3] 智利红.牡丹根腐病的发生与防治[J].中国农技推广，2005(4):46.

[4] 关云霄, 胡珂, 贺春玲,等. 牡丹主要病害的田间识别特征[J].安徽农业科学, 2014,42(11):3265-3267，3270.

[5] 吴玉柱，季延平， 刘慇.牡丹的主要病害及其防治研究[J].西部林业科学，2006,35(4)：45-48.

[6] 黄向东， 薛冬， 王书言，等.牡丹土传病害及其防治研究进展[J].中国农学通报，2012,28(28)：114-118.

[7] 郭敏， 徐中青， 高智谋.防治牡丹根腐病的有效药剂筛选[J].植物保护，2009,35(5)：135-138.

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Toxicity Measurement of Six Fungicides against Peony Root Rot Disease

WANG Zhen1, HE Chun-ling1,2, HOU Xiao-gai2,3et al

(1. College of Forestry, Henan University of Science and Technology, Luoyang, Henan 471003；2. College of Agriculture，Henan University of Science and Technology，Luoyang, Henan 471003；3. Peony Engineering Technology Center of College and University in Henan Province, Luoyang, Henan 471003)

[Objective] The aim was to screen out effective chemicals to control root rot disease. [Method] The relative inhibition rate of six kinds of fungicides at 1 mg/L against root rot disease were tested by the hypha growth rate in lab, meanwhile their toxicities were also measured. [Result] Under 1 mg/L, 99% hymexazol had the highest relative inhibition rate (93.50%) againstPhyllostictacommonsii; secondly was 50% carbendazim, with the relative inhibition rate of 89.63%; the relative inhibitory rate of 50% thiram was 20.00%. 99% hymexazol had the best toxicity to peony root rot disease, and itsEC50value only was 0.002 7 mg/L; the followed was 50% carbendazim, and itsEC50value was 0.019 5 mg/L; theEC50of 50% methyl· zinc·Thiram WP was 19.134 6 mg/L. [Conclusion] These results provided the basis for controlling root rot disease in field.

Root rot disease; The relative inhibition rate；Toxicity measurement; Fungicide

河南省洛阳市科技攻关项目(1102061A)；河南教育厅科技攻关项目(13B220995)；河南科技大学SRTP项目(2013263)。

王桢(1990-)，女，河南南阳人，本科生，专业：园林。

2015-04-22

S 432.9

A

0517-6611(2015)17-132-02