孙方博,白金权 ,王 瑶,赵 斌,佟瑶瑶,张晓霞 (吉林医药学院:.临床医学院,2.附属医院肛肠外科,吉林 吉林 3203)
结直肠癌是严重威胁人类健康的恶性疾病,其发病率及死亡率呈逐年上升趋势,随着化疗药物和分子靶向药物的开发与应用,结肠癌的治疗效果较以往有所提高,但疗效仍不能令人满意,且化疗药物带来的毒副作用及耐药事件的发生,导致化疗的失败一直是困扰着医生的一个难题[1]。故探索高效低毒的抗肿瘤药物已成为目前研究的热点话题。本实验主要研究芝麻素对人结肠癌细胞是否具有诱导凋亡及抗肿瘤作用,并探究可能的抗肿瘤机制。
人结肠癌SW480 细胞株购自中科院上海生物细胞库。芝麻素购自成都曼思特生物科技有限公司(产品编号:A0174-20 mg,Purity:≥98% HPLC),4 ℃保存,使用时将芝麻素加入Trichloromethane 中溶解,再溶于DMEM 液中配制成所需浓度。DMEM 培养液、NCS、凋亡双染检测试剂盒、免疫组化试剂盒购自中生华美(北京)科技有限公司。其他设备有倒置显微镜,CO2细胞培养箱,超净工作台,电热恒温水浴箱,超低温冰柜,离心机,电热恒温鼓风干燥箱,光学显微镜,冰箱,立式高压蒸汽灭菌器等。
实验检测开始前24 h 行常规细胞换液,取对数生长期SW480 细胞株,经消化后制备成单细胞悬液并进行细胞计数(细胞浓度为1 ×106/mL),将细胞接种在96 孔板内180 μL,细胞贴壁48 h 后将每孔分别加入芝麻素终浓度达20、40、60、80、100、120、140 mg/L 20 μL,另设空白对照组(只加培养液)和对照组(只加……