乳腺肿瘤组织中BCSG1、MMP-2、TIMP-2和VEGF蛋白的表达*

郭茂华, 郑瑞锋，申培红, 胡景团, 汪晟坤, 蔺红丽, 乔亚光, 陈峰杰, 李彦伟, 赵 琼

1)河南护理职业学院病理学教研室 安阳455000 2)中国人民武装警察部队河南总队医院肿瘤中心 郑州450052 3)郑州大学基础医学院 郑州450009 4)郑州大学第五附属医院病理科 郑州450052

乳腺肿瘤组织中BCSG1、MMP-2、TIMP-2和VEGF蛋白的表达*

郭茂华1), 郑瑞锋2)，申培红1,3)#, 胡景团1), 汪晟坤3), 蔺红丽1), 乔亚光1), 陈峰杰1), 李彦伟4), 赵 琼1)

1)河南护理职业学院病理学教研室 安阳455000 2)中国人民武装警察部队河南总队医院肿瘤中心 郑州450052 3)郑州大学基础医学院 郑州450009 4)郑州大学第五附属医院病理科 郑州450052

#通信作者，女，1967年4月生，博士，教授，主任医师，研究方向：肿瘤病理，E-mail:13838122660@163.com

乳腺肿瘤；乳腺癌特异性基因；细胞外基质蛋白；基质金属蛋白酶；血管内皮生长因子；浸润和转移

以往研究[1-6]显示，在乳癌细胞的生长、浸润、转移过程中，乳癌特异基因1(breast cancer specific gene-1, BCSG1)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)均起到一定的作用。作者对乳腺纤维腺瘤、浸润性导管癌旁乳腺组织、无腋窝淋巴结转移浸润性导管癌和伴腋窝淋巴结转移浸润性导管癌组织中BCSG1、MMP-2、TIMP-2、VEGF蛋白的表达进行了检测，分析其表达特征，为判断乳癌恶性进程和评估预后提供依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 标本来源于郑州大学第五附属医院及河南省肿瘤医院病理科2008年1月至2010年12月手术切除的乳腺肿瘤标本。患者均为女性，年龄32～65岁，术前均未经任何抗肿瘤治疗。纤维腺瘤40例，乳腺浸润性导管癌旁增生组织(浸导癌旁)48例，乳腺浸润性导管癌无淋巴结转移组织(浸导癌1组)13例，乳腺浸润性导管癌伴淋巴结转移组织(浸导癌2组)49例，术后均经常规病理检查确诊。

1.2 BCSG1、MMP-2、TIMP-2、VEGF的检测 取手术切除标本，常规固定、脱水、石蜡包埋, 3 μm厚连续切片。采用免疫组化SP法进行检测。 阳性对照为已知阳性切片，阴性对照采用 PBS代替一抗。BCSG1鼠抗人单克隆抗体购自美国Santa Cruz生物技术有限公司，MMP-2、TIMP-2鼠抗人单克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司，VEGF兔抗人多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，SP免疫组化试剂盒购自上海太阳生物技术有限公司。

1.3 结果判定 参考Mohsin等[7]报道的标准并加以改良进行结果判定。BCSG1、MMP-2、TIMP-2、VEGF蛋白阳性细胞均表现为细胞浆呈棕黄或棕褐色着色。每张切片选取10个热点，在高倍镜视野下计数细胞，计算阳性细胞百分数。阳性细胞百分数<25%计0分，25%～计1分，51%～计2分，>75%计3分；轻度着色计1分，中度着色计2分，重度着色计3分。两项得分之和<3分为阴性，≥3分为阳性[8]。

1.4 统计学处理 实验结果采用SPSS 17.0分析，4种组织中蛋白阳性率的比较采用χ2检验，用列联系数描述乳腺浸润性导管癌组织中各指标间的关联程度。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 4组乳腺组织中BCSG1、MMP-2、TIMP-2和VEGF的表达 见表1。在纤维腺瘤、乳腺浸润性导管癌旁、乳腺浸润性导管癌无淋巴结转移以及乳腺浸润性导管癌伴淋巴结转移组织中BCSG1、MMP-2、VEGF阳性率逐渐增高，TIMP-2阳性率逐渐降低。

表1 4组乳腺组织中BCSG1、MMP-2、TIMP-2和VEGF的表达 例(%)

2.2 乳腺浸润性导管癌组织中VEGF、BCSG1、 MMP-2、TIMP-2表达之间的关系 乳腺浸润性导管癌组织中， BCSG1与VEGF、MMP-2的表达有一定的关联性，与TIMP-2的表达无关。VEGF与MMP-2的表达有一定的关联性，与TIMP-2的表达无关。见表2、3。

表2 乳腺浸润性导管癌组织中BCSG1与MMP-2、TIMP-2、VEGF表达的关系 例

*:rP=0.255,P=0.038;#：rP=0.112,P=0.374;△:rP=0.268,P=0.029。

表3 乳腺浸润性导管癌组织中VEGF与MMP-2、TIMP-2表达的关系 例

*:rP=0.300,P=0.013;#：rP=0.104,P=0.409。

3 讨论

BCSG1是由Ji等[9]从人乳癌cDNA文库中分离出的基因，编码合成1条含127个氨基酸的蛋白。文献[1]报道，BCSG1在乳腺良性疾病中表达较低,在乳癌中则呈现高表达,其在乳癌发展过程中属中晚期事件，高表达与乳癌进程有关。MMP-2属Ⅳ型胶原酶类，主要降解包括明胶、纤维蛋白、基底膜Ⅳ、Ⅴ和Ⅶ型胶原等在内的多种胶原蛋白，在肿瘤细胞突破基底膜屏障和浸润转移过程中发挥至关重要的作用[10-11]。TIMP-2为MMP-2的特异性抑制因子[12]，多项研究[1-2，13]表明二者在肝癌、胃癌、大肠癌、乳癌、卵巢癌等多种肿瘤组织中均表达较高。VEGF是一类血管淋巴管内皮生长因子的总称，在众多促血管生长因子中作用力最强，与肿瘤的侵袭转移关系密切；在多种肿瘤组织中，如乳腺肿瘤、胃癌、大肠癌、胰腺癌、上皮性卵巢癌、结直肠癌等，VEGF表达均明显升高[5-6,14]。

该研究结果表明，在纤维腺瘤、乳腺浸润性导管癌旁、乳腺浸润性导管癌无淋巴结转移以及乳腺浸润性导管癌伴淋巴结转移组织中BCSG1、MMP-2、VEGF阳性率逐渐增高，TIMP-2阳性率逐渐降低，与上述相关报道结果一致。可以看出，BCSG1、MMP-2、VEGF为乳腺肿瘤进程中的危险因子，而TIMP-2发挥一定的保护作用。相关性分析结果显示，乳腺浸润性导管癌组织中BCSG1与MMP-2、VEGF表达均呈正关联，与TIMP-2表达无关，而VEGF与MMP-2表达亦呈正关联，与TIMP-2表达无关。因此，作者认为BCSG1、MMP-2、TIMP-2、VEGF均与乳癌发生、发展、浸润、转移关系密切，其检测对指导判断患者乳癌恶性进程和估计预后具有重要的指导价值。

[1]Shen PH,Fan QX,Li YW,et al.SNCG shRNA suppressed breast cancer cell xenograft formation and growth in nude mice[J].Chin Med J (Engl),2011,124(10):1524

[2]Gu YM,Tan JX,Lu XW,et al.BCSG1 methylation status and BCSG1 expression in breast tissues derived from Chinese women with breast cancer[J].Oncology,2008,74(1/2):61

[3]Mroczko B,Lukaszewicz-Zając M,Gryko M,et al.Clinical significance of serum levels of matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) and its tissue inhibitor (TIMP-2) in gastric cancer[J].Folia Histochem Cytobiol,2011,49(1):125

[4]Angulo JC,Ferruelo A,Rodríguez-Barbero JM,et al.Detection and molecular staging of bladder cancer using real-time RT-PCR for gelatinases (MMP-2, MMP-9) and TIMP-2 in peripheral blood[J].Actas Urol Esp,2011,35(3):127

[5]欧玉莱，康敏，周蕾，等.胃癌中幽门螺杆菌L型感染与MIF、MMP-9、VEGF表达的关系[J].南方医科大学学报，2014,34(2)：180

[6]Taira T,Yamamoto N.Anti-VEGF therapy for lung cancer[J].Nihon Rinsho,2012,70(12):2159

[7]Mohsin SK,Zhang M,Clark GM,et al.Maspin expression in invasive breast cancer: association with other prognostic factors[J].J Pathol,2003,199(4):432

[8]张志刚,张祥宏,刘巍,等.BCSG1 survivin在浸润性乳腺癌中的表达及预后相关性的研究[J].中国肿瘤临床,2008,35(18):1060

[9]Ji H,Liu YE,Jia T,et al.Identification of a breast cancer-specific gene, BCSG1, by direct differential cDNA sequencing[J].Cancer Res,1997,57(4):759

[10]Singer CF,Kronsteiner N,Marton E,et al.MMP-2 and MMP-9 expression in breast cancer-derived human fibroblasts is differentially regulated by stromal-epithelial interactions[J].Breast Cancer Res Treat,2002,72(1):69

[11]Mohammad MA,Zeeneldin AA,Abd Elmageed ZY,et al.Clinical relevance of cyclooxygenase-2 and matrix metalloproteinases (MMP-2 and MT1-MMP) in human breast cancer tissue[J].Mol Cell Biochem,2012,366(1/2):269

[12]Remacle A,Mccarthy K,No⊇l A,et al.High levels of TIMP-2 correlate with adverse prognosis in breast cancer[J].Int J Cancer,2000,89(2):118

[14]Waldner MJ,Neurath MF.Targeting the VEGF signaling pathway in cancer therapy[J].Expert Opin Ther Targets,2012,16(1):5

(2014-06-18 收稿 责任编辑王 曼)

10.13705/j.issn.1671-6825.2015.03.036

*郑州市科技局科技领军人才项目 10LGRC173