河北涉县不同采收期柴胡药材的质量研究*

★ 侯芳洁 李英宋军娜郑玉光*（.河北中医学院 石家庄05000；.河北医科大学 石家庄05007）

柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifoliumWilld.的干燥根，按性状不同，分别习称“北柴胡”及“南柴胡”，具有解表和里、疏肝解郁、升举阳气之功效[1]。迄今已从柴胡中分离鉴定出约60种皂苷类化合物、上百种挥发油类化合物及多糖类成分[2]。其中，柴胡皂苷是柴胡主要有效成分之一，是柴胡重要的质量评价指标，具有广泛的生物学活性，尤其以柴胡皂苷d的药理活性最强[3]。

在第四次全国中药资源普查过程中，发现河北省涉县地区柴胡分布范围很广，但是采收时间不统一，导致药材质量参差不齐。影响中药药效的因素有很多，诸如种质、土壤、水质、采收时间、产地加工、炮制等，其中采收时间对中药材次生代谢产物的累积有重要影响。不同季节、不同时辰、不同生长年限等都会影响中药质量。柴胡一般春秋两季采挖，由于我国南北、东西气候的巨大反差，药材适宜采收期的制定应该因地制宜。因此加强中药材采收期研究，对规范药材科学合理采收加工、保证中药疗效具有重要意义。为此，笔者对不同采收时间的柴胡样品进行了收集，通过其主要有效成分柴胡皂苷进行动态分析，为明确河北省涉县地区柴胡的最佳采收期提供依据，对保证药材质量和临床疗效具有重要的意义。

1 材料

1.1 药材 21个柴胡样品2013年采自河北省涉县，经河北中医学院郑玉光教授鉴定为伞形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.的干燥根，见表1。

表1 柴胡样品

1.2仪器 岛津LC-15C高效液相色谱仪（日本岛津制作所）；SPD-15C紫外检测器（日本岛津制作所）；CP225D型双量程电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.3 试剂 柴胡皂苷a（批号110777-201108）和柴胡皂苷d（批号110778-201208）均购自中国食品药品检定研究院。乙腈、甲醇（色谱纯，Fisher Scientific公司）；氨水（石家庄市华迪化工工贸有限公司），水为自制超纯水。

2 方法

2.1 对照品溶液的制备 精密称定柴胡皂苷a对照品7.98 mg、柴胡皂苷d对照品9.94 mg，分别置10 mL容量瓶中，甲醇超声溶解，定容，得柴胡皂苷a，柴胡皂苷d的甲醇溶液。再分别精密量取配制好的柴胡皂苷a、d各5 mL，同置于10 mL容量瓶中，甲醇定容，得柴胡皂苷a（0.399 mg/mL）、柴胡皂苷d（0.497 mg/mL）的混合标准溶液，即为对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 精密称定柴胡粉末约0.5 g，至具塞锥形瓶中，加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25 mL，密塞，30℃超声处理（功率200W，40Hz）30 min，滤过，用甲醇20 mL分2次洗涤容器和药渣，洗液与滤液合并，回收至干。残渣加甲醇溶解转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，临用前过0.22μm微孔滤膜，即得。

2.3 色谱条件 按2010版《药典》柴胡项下柴胡皂苷含量测定的方法：色谱柱为Sinochrom ODS-APC18柱（4.6 mm×200 mm，5μm）；乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，柱温30℃，检测波长为210 nm，进样量20μL，理论板数按柴胡皂苷a峰计算应

不低于10000，见图1。

图1 高效液相色谱图

2.4 标准曲线 精密称取柴胡皂苷a对照品3.45 mg，柴胡皂苷d对照品4.06 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇适量超声溶解并定容至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液5，10，20，30，40，50μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线并计算回归方程。

2.5 含量测定 取收集的21份不同产地和采收期的柴胡药材粉末各0.5 g，按2.2项下方法制备供试品溶液，吸取供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，以标准曲线法计算柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。

3 结果

3.1 标准曲线 以进样量X（μg）为横坐标，峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程，得到柴胡皂苷a的回归方程为Y=309603.3X+2242.9（r=0.9999），柴胡皂d的回归方程为Y=369868.3X+7970.86（r=0.9999），实验表明柴胡皂苷a在1.725~17.25μg呈良好的线性关系，柴胡皂苷d在2.03~20.3μg呈良好的线性关系。

3.2 含量测定 21份不同产地和采收期的柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量测定结果见图2-图4。

4 讨论

图2 不同采收期石峰同生柴胡中柴胡皂苷a、d及二者总含量

图3 不同采收期山神庙柴胡中柴胡皂苷a、d及二者总含量

图4 不同采收期石峰永会柴胡中柴胡皂苷a、d及二者总含量

4.1 涉县地处太行山东麓，河北省西南角，山西、河北、河南三省交界处，年降水量590mm，属半湿润大陆性季风易旱气候[4]。从柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量测定结果上可以看出，不同产地与采收时间柴胡的柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量有明显的差别。

4.2 不同产地的柴胡为同一品种，且皆为一年生柴胡，石峰同生地区柴胡的柴胡皂苷a，d含量明显高于其他两个产地，因为石峰同生地区属于石灰岩土地，含钙量比较高，对植株生长和有效成分的积累比较有利。

4.3 在同一产地中，不同采收时间的柴胡样品含量差异也较大，在石峰同生地区柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量以6月份较高，10月份较低；在山神庙地区柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量以8月份最高，10月份最低；在石峰永会柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量以8月份最高，11月份最低。综上所述，河北涉县地区的柴胡在6、8月份有效成分含量比较高，质量较好，可以作为河北涉县地区柴胡最佳采收期确定的重要依据，但是由于不同地区的最佳采收时间可能与当地气候、种植环境有关，还要从多方面考虑。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：263.

［2］谢东浩，蔡宝昌，安益强，等.柴胡皂苷类化学成分及药理作用研究进展［J］.南京中医药大学学报，2007，23（1）：63-65.

［3］吕晓慧，孙宗喜，苏瑞强，等.柴胡及其活性成分药理研究进展［J］.中国中医药信息杂志，2012，19（12）：105-107.

［4］牛永良，张虹，王仁如，等.对涉县石灰岩山地农业结构调整的思考［J］.现代农业科技，2013，12（4）：299-301.