HPLC测定贵州不同产地八月瓜中齐墩果酸的含量

李 香

贵州省黔南民族医学高等专科学校，贵州 都匀 558000

HPLC测定贵州不同产地八月瓜中齐墩果酸的含量

李 香

贵州省黔南民族医学高等专科学校，贵州 都匀 558000

目的：建立HPLC测定贵州不同产地八月瓜中齐墩果酸含量的方法。方法：以70%乙醇90℃水浴回流1h，过滤，滤液挥干，加浓盐酸，70%乙醇回流4h。流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(87∶13∶0.04∶0.02)；检测波长210nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃。结果：齐墩果酸分离效果好，在0.0654～2.616μg(r=0.9999)呈良好线性关系。结论：不同产地八月瓜中齐墩果酸含量存在一定差异。

八月瓜；不同产地；齐墩果酸；HPLC

八月瓜为木通科植物木通Akebiatrifoliate(Thunb.)Koidz的果实，又称木通子、八月扎、八月炸、预知子、腊瓜等，分布于我国南部、长江流域和西北地区。民间多用于治疗小便赤涩、淋浊水肿、胸中烦热、喉痹咽痛、遍身拘痛、妇女经闭、乳汁不通等疾病。八月瓜的主要化学成分为齐墩果酸类三萜、三萜皂甙，具有较强生物活性[1]。本实验采用HPLC法测定4个不同产地八月瓜中齐墩果酸含量，为不同产地八月瓜质量研究提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-20AT/SPD-20A UV/vis Detector高效色谱仪(日本岛津)；Shim-pack VP-ODS色谱柱(150×4.6mm，5μm)；WS205电子天平(瑞士梅特公司)；DZG-6000电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司)；HA-4恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)。

1.2 试剂 甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯。

1.3 试药 齐墩果酸对照品(批号：110709-200505，购于中国药品生物制品检定所)；八月瓜药材采于贵州云顶、大定、云雾、都匀，由黔南民族医专魏学军老师鉴定为木通科木通属落叶木质藤本植物Akebiatrifoliate(Thunb.)Koidz的果实。

2 方法与结果[2-5]

2.1 色谱条件 Shim-pack VP-ODS色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(87∶13∶0.04∶0.02)；检测波长210nm；流速为1.0ml/min；柱温为30 ℃。

2.2 对照品溶液制备 精密称量干燥至恒重的齐墩果酸对照品16.36mg，加入一定量甲醇定容至25ml，摇匀，配制得浓度为0.654mg/ml齐墩果酸对照品母液。

2.3 供试液的制备 取干燥到恒重并过四号筛的八月瓜粉末0.582g，加入6ml 70%乙醇，90℃水浴回流1h，回流1次，过滤，滤液挥干，加0.54ml浓盐酸，加5.44ml 70%乙醇，回流4h，挥干溶剂，用甲醇定容至25ml，备用。

2.4 方法学考察

2.4.1 标准曲线的制备 分别精密吸取0.2、0.4、0.8、1、2、4、8 ml对照品母液用甲醇定容至10ml，摇匀，分别配成浓度0.01308、0.02616、0.05232、0.0654、0.1308、0.2616 、0.5232mg/ml的齐墩果酸对照品溶液。精密量取5μl，注入高效液相色谱仪，测定结果，以齐墩果酸对照品溶液的质量浓度X(mg/ml)为横坐标，峰面积值Y为纵坐标，得回归方程Y=2.3430×106X-6.8714×103，r=0.9999，线性范围为：0.0654 ～2.616 μg。结果表明齐墩果酸与峰面积值在线性范围内有良好的线性关系。

2.4.2 专属性实验 据“2.3”项制备供试液，分别精密量取5μl对照品溶液、供试液、色谱甲醇溶液注入高效液相色谱仪，结果表明，阴性样品在相应位置无干扰。结果见图1。

2.4.3 精密度试验 称取干燥至恒重药材粉末约0.5 g，依“2.3”项下制备供试液，精密吸取供试液5μl，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，测定齐墩果酸峰面积，计算RSD=1.83%。结果表明仪器精密度良好。

注：A：色谱甲醇液；B:对照品溶液；C：供试液。

2.4.4 稳定性试验 称取干燥至恒重药材粉末约0.5g，据“2.3”项下制备供试液，精密吸取样品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，每间隔1h进样一次，记录齐墩果酸峰面积，计算RSD=2.53%。结果表明样品在8h内稳定性良好。

2.4.5 重复性试验 称取干燥至恒重的药材粉末约0.6g，6份，据“2.3”项制备供试液，精密吸取样品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定齐墩果酸峰面积，计算含量RSD=2.18%。结果表明该方法重复性良好。

2.4.6 回收率试验 称取干燥至恒重的药材粉末约0.3g，9份，编号1～9号,按一定比例量吸取一定量已配好对照品溶液。1、2、3号加入原药材含量80%对照品；4、5、6加入原药材含量100%对照品；7、8、9加入原药材含量120%对照品。据“2.3”项制备供试液，精密吸取供试液5μl，注入高效液相色谱仪，测定齐墩果酸的峰面积，计算平均回收率为100.77%，RSD=2.01%，结果见表1。结果表明本方法回收率较好，方法可行。

2.5 样品含量测定试验 样品取自4个不同产地，每个产地采集不同3个区域，各称取干燥至恒重的药材粉末6.0g，据“2.3”项制备供试液，精密吸取样品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，计算各产地齐墩果酸含量，结果见表2。

表1 回收率实验(n=9)

表2 样品齐墩果酸含量测定(n=4)

3 讨论

3.1 齐墩果酸是一类五环三萜类化合物，不溶于水，可溶于乙醇、乙醚、甲醇、氯仿等有机溶剂，通过两步选取提取工艺，从第一步试验结果得出用70%乙醇提取时，齐墩果酸含量较高；在第二步试验中对盐酸浓度等进行考察，通过方差分析，试验结果的差异具有统计学意义，说明齐墩果酸在植物体内主要以皂苷形式存在，经酸水解为游离形式。

3.2 本实验研究发现，云顶与大定两个产地的齐墩果酸含量接近；云顶与云雾、都匀的差异较大。

[1]刘桂艳,王晔.木通属植物木通化学成分及药理活性研究概况[J].中国药学杂志,2004,39(5):330-332.

[2]刘卫国,杨文钰,肖启银.三叶木通齐墩果酸的超声提取工艺研究[J].中药材,2005,28(2):140-141.

[3]金有景.抗癌食药草奉[M].北京:中国食品出版杜,1989:191-198.

[4]牡乃正,张风英.攀援植物[M].北京:中国林业出版杜,1984:68-69.

[5]赵蓉.正交试验法优选女贞子中齐墩果酸的提取工艺[J].海峡药学,2007,19(12):19-20.

Determination of different regions of Guizhou in August melon oleanolic acid content in HPLC

LI Xiang

Qiannan Medical College for Nationalities,Duyun 558000,China

Objective To establish the content of oleanolic acid in different places of Guizhou in August melon in the determination method of HPLC.Methods Using 70% ethanol,90℃ water bath reflux for 1h,the reflux for 1 times,filtering,adding concentrated hydrochloric acid,70% ethanol,refluxing for 4h,the mobile phase:methanol water acetic acid-three triethy lamine(87∶13∶0.04∶0.02);the detection wavelength of 210nm;the flow rate was 1ml/min;column temperature was 30℃.Results Oleanolic acid separation effect is good,in the 0.0654～2.616μg(r=0.9999)showed a good linearrelationship.Conclusion There were significant differences among different areas in the content of oleanolic acid in August melon.

Akebiatrifoliate;different habitats;Oleanolic acid;HPLC

李香，女，讲师，主要从事中药复方及质量控制研究。

R284.1

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1007-8517(2015)09-0012-02

2015.02.04)