双黄消痤丸对痤疮模型兔血清白细胞介素—8和肿瘤坏死因子—α含量的影响

孔连委等

摘要：目的 探讨双黄消痤丸治疗痤疮的作用机制。方法 取雄性日本大耳白兔48只，采用随机数字表法将其分为空白组、模型组、阳性药组和双黄消痤丸高、中、低剂量组。除空白组外，建立兔耳痤疮模型，成模后各组给予相应药物灌胃，每日1次，连续14 d。给药结束后采血，采用放射免疫法测定血清中白细胞介素-8 （IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。结果 与空白组比较，模型组IL-8、TNF-α含量明显升高（P<0.01）；与模型组比较，除双黄消痤丸低剂量组外，各给药组IL-8、TNF-α含量明显降低（P<0.01）。结论 双黄消痤丸通过降低兔血清IL-8、TNF-α含量起到治疗痤疮的作用。

关键词：双黄消痤丸；痤疮；白细胞介素-8；肿瘤坏死因子-α；兔

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）06-0072-03

痤疮是一种最为常见的皮肤病，多发于面部、背部、胸等富含皮脂腺的部位。痤疮的形成与雄激素水平过高、痤疮丙酸杆菌、皮脂腺导管异常角化、免疫因素、环境与遗传等因素有关[1-6]。双黄消痤丸为黑龙江省中医药科学院自主研发的中成药，临床用于治疗痤疮效果显著[7]。本研究通过观察双黄消痤丸对兔血清白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响，探讨其对免疫系统的作用，为临床用药提供实验依据。

1 实验材料

1.1 动物

12周龄健康雄性日本大耳白兔48只，体质量（1.5±0.2）kg，标准饲料喂养，哈尔滨市松北区华宇养殖场提供，动物合格证号SCXK-（黑）2008001。

1.2 药物

双黄消痤丸，黑龙江省中医药科学院制剂室提供，批号131101；丹参酮胶囊，河北兴隆希力药业有限公司，批号20130822。

1.3 主要试剂与仪器

煤焦油（营口华源石化有限公司），IL-8、TNF-α试剂盒（北京北方生物技术研究所），痤疮丙酸杆菌（黑龙江省中医药科学院）。AP280-123型包埋机（德国MICROM公司），HM335E型切片机（德国MICROM公司），MDF-382E型超低温冰箱（日本三洋公司），恒温高速离心机（德国BACKMAN公司）。

2 实验方法

2.1 分组

实验动物适应性喂养1周后，按体质量采用随机数字表法随机分为空白组、模型组、阳性药组及双黄消痤丸高、中、低剂量组，每组8只。

2.2 造模

按文献[8]方法建立并判定兔耳痤疮模型。除空白组外，在每只家兔左右耳内侧耳管开口处2 cm×2 cm范围，每日用玻璃棒均匀涂抹浓度为50%煤焦油（煤焦油和液体石蜡体积按1∶1混合），每次0.5 mL连续2周。自建模第7日开始后，于涂煤焦油处皮内注射痤疮丙酸杆菌液（痤疮丙酸杆菌菌株1株，在脑心浸液培养基中转种活化并增殖，搜集菌落后洗涤并过滤，调整痤疮丙酸杆菌浓度为6×107/mL，于95 ℃水浴灭活5 min）50 ?L/耳。

建模第14日，在空白组与造模动物中随机选取10只动物，在其左耳相同位置处用记号笔做标记，在该处以1 cm的打孔器进行兔耳皮肤病理活检，显微镜下观察标本的病理结构，验证痤疮模型复制情况。光镜下可见：角化过度，表皮和毛囊上皮的颗粒层增厚，棘层肥厚，相邻扩张的毛囊互相融合，毛囊口及漏斗部都充满角化物质，并向皮脂腺延伸，毛囊口角栓堵塞，毛囊漏斗部充满角化物质并扩大成壶状；真皮上层毛细血管扩张明显，毛囊周围弥漫散在炎性细胞浸润，以小圆形细胞为主，还有少量中性粒细胞。

2.3 给药

造模成功后开始给药，双黄消痤丸高、中、低剂量组给予双黄消痤丸1.68、0.84、0.42 g/kg，阳性药组给予丹参酮胶囊0.187 g/kg，给药体积10 mL/kg，空白组和模型组给予等体积生理盐水，每日1次，连续14 d。

2.4 检测指标

分别于动物末次给药20 h后，一次性5 mL注射器进行兔的立位心脏采血，采用放射免疫法测定血清中IL-8、TNF-α含量，按试剂盒说明书操作。

3 统计学方法

采用SPSS19.0统计软件进行分析。实验数据用—x±s表示，采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

4 结果

4.1 双黄消痤丸对模型兔血清白细胞介素-8含量的影响

与空白组比较，模型组大鼠血清IL-8含量明显升高（P<0.01）；与模型组比较，双黄消痤丸高、中剂量组及阳性药组大鼠血清IL-8含量明显降低（P<0.01）。结果见表1。

4.2 双黄消痤丸对模型兔血清肿瘤坏死因子-α含量的影响

与空白组比较，模型组大鼠血清TNF-α含量明显升高（P<0.01）；与模型组比较，双黄消痤丸高、中剂量组及阳性药组大鼠血清TNF-α含量明显降低（P<0.01）。结果见表2。

5 讨论

痤疮是毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤疾病。研究表明，机体的细胞免疫和体液免疫均参与痤疮的发病过程[9]。人类Th细胞存在Th1和Th2两个不同功能的亚群，Th1细胞主要分泌IL-2和TNF-α等特征性细胞因子，介导细胞免疫；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-8及IL-10等细胞因子，介导体液免疫。尤其Th2细胞分泌的IL-8在免疫和炎症反应中发挥重要作用，参与了痤疮的病理生理过程。研究发现，痤疮患者血清中的IL-8、IL-6及TNF-α水平高于正常对照，提示这3种炎症递质参与了痤疮的发病过程[10]。

双黄消痤丸由金银花、野菊花、黄连、黄柏、黄芩、栀子、赤芍、牡丹皮、玄参、甘草等组成。方中金银花能清热解毒、消痈散结，为外科之疮疡圣药，为君药；野菊花、紫花地丁皆能清热解毒，黄芩、黄柏、黄连、栀子四药合用取自《外台秘要》“黄连解毒汤”热毒壅盛直折之意，可清上、中、下三焦之火毒热盛，共为臣药；赤芍可清热凉血、散瘀止痛，牡丹皮可凉血活血，玄参养阴凉血兼可解毒散结，诸药配伍可有清热凉血、消瘀散结之功，共为佐药；一味甘草调和诸药、护胃和中，为使药。诸药合用，共奏清热解毒、消瘀散结之功。

研究显示，双黄消痤丸方中黄连、黄柏、黄柏、栀子（黄连解毒汤）对大鼠TNF-α、TNF-γ、IL-2具有显著的抑制作用[11]。野菊花提取液（7 mL/只）给发生变态反应的家兔连续灌胃25 d，可抑制兔血清中可溶性IL-2、IL-6、TNF-α的升高，但不能下降至造模前水平[12]。本实验研究表明，双黄消痤丸可明显降低兔耳痤疮模型血清中IL-8、TNF-α含量，同时参与体液免疫与细胞免疫，且效果明显。表明双黄消痤丸对于痤疮的治疗作用与免疫系统调节有密切关系。

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（收稿日期：2014-09-18；编辑：华强）