水母雪莲黄酮合成酶FNSII基因克隆及其在3种细胞系中的表达

王冰洁，李厚华，王亚杰,2，高艳，付婉艺，魏新翠



水母雪莲黄酮合成酶基因克隆及其在3种细胞系中的表达

王冰洁1，李厚华1，王亚杰1,2，高艳1，付婉艺3，魏新翠1

1 西北农林科技大学风景园林艺术学院，陕西杨凌 712100 2 宝鸡海升现代农业有限公司，陕西宝鸡 721100 3 浙江大学农业与生物技术学院，浙江杭州 310000

王冰洁, 李厚华, 王亚杰, 等. 水母雪莲黄酮合成酶FNSII基因克隆及其在3种细胞系中的表达. 生物工程学报, 2015, 31(12): 1720–1727.Wang BJ, Li HH, Wang YJ, et al. Cloning of flavone synthase(FNSII)gene and expression in three cell lines of Saussurea medusa. Chin J Biotech, 2015, 31(12): 1720–1727.

水母雪莲是中国传统珍稀药材，其主要活性成分之一木犀草素具有预防和治疗癌症的功效。以水母雪莲绿色细胞系为试材，采用RT-PCR和RACE-PCR方法获得1个水母雪莲基因cDNA全长，命名为(GenBank登录号为KF170286)。序列分析结果表明：全长1 710 bp，包含34 bp的5ʹ非编码区、125 bp的3ʹ非编码区和1个长度为1 551 bp编码516个氨基酸的开放阅读框。氨基酸序列分析表明SmFNSII属于细胞色素P450 CYP93B亚家族单氧化酶。序列比对和系统进化分析表明，SmFNSII氨基酸序列与同科植物毛山柳菊的亲缘关系最近，相似性达87%以上。实时荧光定量PCR分析表明，在白色、绿色和红色细胞系均有表达，红色系中的表达量最高，白色系中表达量最低，此结果与高效液相色谱分析3种颜色细胞系中木犀草素含量结果一致。构建pET-原核表达重组质粒，并在大肠杆菌中诱导表达，诱导蛋白大小与预期一致。通过筛选基因表达水平高、高产木犀草素的水母雪莲细胞系和植株，可培育抗炎抗癌活性较高、具有高保健功能的雪莲生药新品种。

水母雪莲，黄酮合成酶FNSII，基因克隆，表达分析，原核表达