应用实时荧光定量PCR检测血清miR-122和miR-22及其在慢性乙型肝炎患者中的表达

姜跃炜 叶 瑾 朱小区



应用实时荧光定量PCR检测血清miR-122和miR-22及其在慢性乙型肝炎患者中的表达

姜跃炜 叶 瑾 朱小区

目的 建立血清中microRNA(miRNA)的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的检测方法，对慢性乙型肝炎患者血清中miR-122和miR-22的表达水平进行检测和分析，探讨其在慢性乙型肝炎患者血清中表达的意义。方法 茎环引物用于成熟型miRNA反转录，以建立SYBR Green Ⅰ PCR筛选和定量检测miRNA的方法。同时，采用10倍梯度稀释的miR-122标准品cDNA(1～109拷贝/微升)评价其敏感度；采用熔解曲线评价其检测miRNA的特异性；通过对2×105、2×106、2×107拷贝/微升的miR-122标准品cDNA分别进行批内20次重复实验，以其循环阈值(Ct)的变异系数(CV)评价其精密度。采用建立的qRT-PCR技术检测慢性乙型肝炎患者及正常人血清中miR-122和miR-22的表达水平。结果 建立了茎环引物的RT-PCR法检测血清中的miRNA，该方法的线性范围宽，敏感度高，重复性好，方法简便。在慢性乙型肝炎患者组中血清miR-122和miR-22的相对表达量分别为17.88和5.35；与正常对照组中血清miR-122和miR-22的相对表达量(分别为1.80和1.67)比较，差异有统计学意义(P均=0.000)。结论 建立了茎环引物RT-PCR实时荧光定量PCR方法检测血清中的miR-122和miR-22，血清miR-122和miR-22在慢性乙型肝炎患者的血清中表达显著升高。

miR-122 miR-22 慢性乙型肝炎

我国乙型肝炎病毒表面抗原携带者占全国人口的7.18%[1]。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是引起慢性肝炎、肝硬化和肝癌的最主要原因。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类高度保守、长度20～24 个核苷酸的非编码单链小RNA，miRNA是一类在血清中稳定存在的短小核苷酸，已有报道证实miRNA可以作为肝脏损伤和妊娠的非常敏感的分子标志物[2,3]。……