巨细胞病毒嵌合癌胚抗原介导单纯疱疹病毒胸苷激酶联合丙氧鸟苷自杀基因体系

王成兴等

[摘要] 目的 观察巨细胞病毒（CMV）嵌合以癌胚抗原为启动子，以腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因重组构建体Ad-CMV-CEA-HSV/TK联合丙氧鸟苷（GCV）体内抗结肠癌的疗效。 方法 构建人结肠癌裸鼠移植瘤模型，按不同浓度梯度Ad-CMV-CEA-HSV/TK（1.0×109/kg、5.0×109/kg、10.0×109/kg）经尾静脉注射带瘤小鼠后，腹腔注射相同浓度GCV（50 mg/kg），并设空白对照组及不同浓度的Ad-CEA-HSV/TK/GCV对照（1.0×109/kg、5.0×109/kg、10.0×109/kg），共设A～G 7组，每组各10只小鼠。观察肿瘤体积、重量、肿瘤体积-时间曲线、肿瘤抑制率及生存期。 结果 Ad-CMV-CEA-HSV/TK/GCV及Ad-CEA-HSV/TK/GCV对人结肠癌裸鼠移植瘤生长均具有抑制作用，对移植瘤的体积及重量抑制呈作用物浓度依赖性；且Ad-CMV-CEA-HSV/TK/GCV抑制能力较Ad-CEA-HSV/TK/GCV显著，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 Ad-CMV-CEA-HSV/TK/GCV体系对结肠癌具有明确的实验性治疗作用，为人结肠癌及结肠癌远处转移灶的Ⅰ期临床治疗试验提供科学实验依据，具有广阔的临床应用前景。

[关键词] 结肠癌；基因治疗；巨细胞病毒；重组腺病毒；癌胚抗原

[中图分类号] R735.35 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）06（b）-0013-04

Therapeutic effect of cytomegalovirus chimeric carcinoembryonic antigen promoter combined with HSV-TK/GCV system for human colon cancer

WANG Chengxin ZENG Shanqi YANG Ping ZHANG Tong WEI Jianchang CHEN Huacui CAO Jie

Department of Gastrointestinal Surgery， the Affiliated Guangzhou First People's Hospital of Guangzhou Medical University， Guangdong Province， Guangzhou 510180， China

[Abstract] Objective To approach the treatment efficiency of replication defective adenovirus carrying HSV/TK gene under control of the cytomegalovirus union carcinoembryonic antigen promoter and ganciclovir （GCV） in nude mice xenografts model of human colon cancer. Methods The model of human colon cancer xenografts in BALB/c nude mouse was builded successfully. After injection of different concentration gradient of Ad-CMV-CEA-HSV/TK （1.0×109/kg， 5.0×109/kg， 10.0×109/kg） in caudal vena， the same level of GCV （50 mg/kg） was given by peritoneal injection， and they were divided into the blank control group and Ad-CEA-HSV/TK control group with different concentration （1.0×109/kg， 5.0×109/kg， 10.0×109/kg） were set， in total of 7 groups， each group of 10 mice. The anti-tumor efficacy was analyzed by index of tumor volume， tumor weight， relative tumor curative， and tumor growth curve. Results After therapy， growth of human colon cancer xenografts in nude mouse were observably inhibited by Ad-CMV-CEA-HSV/TK/GCV and Ad-CEA-HSV/TK/GCV in a dose dependent， and there were no inhibition plateau. Ad-CMV-CEA-HSV/TK/GCV showed a stronger inhibition ability than Ad-CEA-HSV/TK/GCV （P < 0.05）. Conclusion Ad-CMV-CEA-HSV/TK/GCV system is highly experimental effective and safe to inhibit the growth of human colon cancer xenografts， provides scientific basis forⅠ period experimental of clinical treatment of human colon cancer and colon cancer distant metastases， and has a wide prospect of clinical application.

[Key words] Colon cancer； Gene therapy； Cytomegalovirus； Recombinant adenovirus； Carcinoembryonic antigen

结肠癌是严重危害人类健康的重大疾病之一，在北美、欧洲和澳大利亚，结肠癌发病率在消化道肿瘤中位居第一位，是肿瘤相关死亡病例中的第二位原因[1]。近20年来我国结肠癌发病率呈上升趋势，已经发展成为常见恶性肿瘤中发病率增长最快的恶性肿瘤[2]。传统的结肠癌治疗方案主要有手术治疗、放疗和化疗，而这些疗法或其联合疗法均不能达到令人满意的结果。近年来，单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷（herpes simplex virus-thymidine kinase/ganciclovir，HSV-TK/GCV）自杀基因系统在肿瘤基因治疗研究领域成为热点[3-4]。本研究将验证嵌合巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）增强子的HSV-TK/GCV对肿瘤的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 材料

PRMI1640培养液、10%灭活胎牛血清、链-青霉素抗体均购自美国GIBCO公司；四甲基偶氮唑盐（MTT）购自美国Sigma公司；……