苦豆子植物生物碱的提取及TLC分析

李生虎 张永康 李 勇 （宁夏职业技术学院 宁夏 银川 750021）

苦豆子植物生物碱的提取及TLC分析

李生虎 张永康 李 勇 （宁夏职业技术学院 宁夏 银川 750021）

本试验采用稀酸水、有机醇结合超声波提取法对苦豆子生物碱进行了提取、薄层层析（TLC）检查、氯仿萃取，提取获得4种生物碱成分，其中有两种生物碱分别与标准参碱、标准槐果碱和标准槐定碱对应，有待进一步定性分析；试验结果表明，采取稀酸溶液和90%的有机醇溶剂结合超声波的提取方法对苦豆子植物中生物碱的提取切实可行。

苦豆子 生物碱 TLC分析

苦豆子是一种多年生草本根茎地下芽植物，其果实和茎叶都极苦。主要分布在我国西北部干旱荒漠区，尤以宁夏、甘肃、青海、新疆及内蒙古等沙漠和荒漠地区生长旺盛，分布很广，是我国西北地区十分常见的野生植物资源，资源相当丰富。其有效成分—生物碱的含量较高，对中枢神经系统、心血管系统、抗病毒、抗炎、免疫及抗肿瘤等方面具有很强的药理生物活性，极具开发价值［1］。本试验采用稀酸水、有机醇结合超声波提取法对苦豆子生物碱进行了提取，进一步探索苦豆子生物碱的提取、分离生产实用技术、工艺研究奠定基础。

1　材料与方法

1.1材料 苦豆子草于2013年8月采自宁夏盐池县，晒干粉碎备用，植物标本由盐池县草原站鉴定。

1.2仪器与试剂 AR1140电子天平、KQ-100DB型数控超声仪、RE-5298A型旋转蒸发仪、90%乙醇（分析纯）、浓盐酸（分析纯）、氯仿（分析纯）、石油醚（分析纯）、正丁醇（分析纯）、次硝酸铋（分析纯）、碘化钾（分析纯）、浓氨水（分析纯）、薄层层析用硅胶。生物碱标准品：纯度＞98%苦参碱（Mtrine）、纯度＞98%槐定碱（Sophoridine）、纯度＞98%槐果碱（Sophcarpine）。

1.3方法 （1）苦豆子生物碱的提取：采用酸水、醇类溶剂提取法［2］，每次取已粉碎好的苦豆子草200g，置于三角瓶中，加入3倍量的90%的乙醇或pH=3的盐酸水溶液，置于超声波装置中，在50Hz强度下处理1h后过滤，提取两遍，滤液合并浓缩得到总浸膏。用适量酸水溶解浸膏得酸水液，用石油醚萃取5次，石油醚层合并浓缩得石油醚组分；将酸水液碱化处理pH=7用氯仿萃取5次，得生物碱（改良碘化钾铋喷雾显色检查）A，碱水液继续碱化处理pH=10用氯仿萃取5次，得生物碱（改良碘化钾铋喷雾显色检查）B，氯仿层合并生物碱A、B浓缩得氯仿总生物碱组分；碱水液进行酸化处理pH=7用正丁醇萃取5次，正丁醇层浓缩得正丁醇总生物碱组分（改良碘化钾铋喷雾显色检查）；水层弃去。其操作流程见图1。

图1　苦豆子生物碱的提取流程图

（2）薄层层析（TLC）检查：①硅胶GF254板制备［3］：将硅胶GF254与0.5%CMCNa水溶液按1：3（g/v）比例研匀，均匀涂于规格75.5mm×25.5mm的玻璃板上，置室温风干1～2d，存于干燥箱中备用。②展开剂配制：氯仿（v）：甲醇（v）：浓氨水（v）4ml：1.5ml：0.05ml，展开剂临用时新鲜配制。③显色剂：改良碘化钾铋试剂。④层析及显色方法：将萃取样品、标准品生物碱苦参碱、槐定碱、槐果碱用少量甲醇溶解，用毛细管点样于GF254硅胶板上，同时点两块相同的硅胶板，置于展开缸中饱和5～10min，上行法展开，待展开剂展开到距硅胶板前沿5mm时，取出挥干溶剂。用改良碘化钾铋显色检查（直接喷雾改良碘化钾铋试剂）。

2　结果

2.1苦豆子生物碱提取试验结果 2kg苦豆子干草粉经90%的乙醇超声提取得到总浸膏0.64kg，出膏率32%，不同溶剂萃取提取物共计91.3g，氯仿萃取组分、正丁醇萃取组分用改良碘化钾铋喷雾显色检查呈橘红色为总生物碱86g ，其中氯仿萃取组分29g，正丁醇萃取组分57g（含有部分沉淀），出碱率4.3%，石油醚萃取组分用改良碘化钾铋喷雾显色检查不显色为非生物碱物质5.3g；2kg苦豆子干草粉经pH=3的盐酸水溶液超声提取得不同溶剂萃取提取物共计32.5g，氯仿萃取组分、正丁醇萃取组分用改良碘化钾铋喷雾显色检查呈橘红色为总生物碱31g，其中氯仿萃取组分8g，正丁醇萃取组分23g（含有部分沉淀），出碱率1.5%，石油醚萃取组分用改良碘化钾铋喷雾显色检查不显色为非生物碱物质1.5g（见表1）。

表1　苦豆子草粉提取结果

2.2薄层层析检查结果 乙醇提取和酸水提取法所得有效成分不同溶剂萃取组分经薄层展开后，改良碘化钾铋喷雾显色。通过显色反应观察和测定Rf值比较，试验结果表明：石油醚萃取组分不显色，石油醚萃取组分中薄层层析检查结果无生物碱成分；氯仿萃取组分出现4个橘红色斑点（a、b、c、d），其中c呈条带状；与标准品生物碱苦参碱、槐定碱、槐果碱对比，氯仿萃取组分橘红色斑点a与苦参碱重合对应，与槐果碱很接近基本对应；氯仿萃取组分橘红色斑点b与槐定碱对应；正丁醇萃取组分中含有1种生物碱成分C1与氯仿萃取组分中含有的1中生物碱c对应（见表2、图2。）

表2　苦豆子草粉生物碱提取薄层层析检查结果

图2　苦豆子生物碱薄层层析检查结果

3　讨论

据文献记载苦豆子生物碱的提取方法按所用溶剂不同可分为酸水提取法、醇类溶剂提取法、亲脂性有机溶剂提取法；按提取条件不同可分为 浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法、超临界流体萃取法［4］。这些方法各有其优缺点，本试验采用了稀盐酸水溶液和90%的有机醇溶剂结合超声提取法分别进行提取，分别应用有机溶剂氯仿、正丁醇和石油醚作为萃取剂进行苦豆子生物碱的萃取，试验结果表明：乙醇提取的生物碱得率较稀盐酸水溶液得率高。理论上应用酸水提取生物碱的得率较高，但酸水提取法提取液体积大，水溶性杂质多，蛋白质、多糖等大分子物质也被提取出来，溶液的粘度大，试验中生物碱的浓缩困难，在浓缩、除杂过程中生物碱没能被全部回收，造成生物碱的浪费，故在本试验中利用酸水提取的苦豆子生物碱的得率比利用乙醇提取的生物碱得率低。本次试验结合超声法进行提取较浸渍法、渗漉法等缩短了提取时间。生物碱常用改良碘化钾铋喷雾显色反应进行检查，试验中应用此方法检查结果表明：氯仿、正丁醇、石油醚三种有机溶剂作为萃取剂比较，氯仿萃取效果较好，氯仿萃取组分提取物出现4个橘红色斑点，至少含有4种生物碱成分；提取物石油醚萃取组分不显色，不含生物碱物质成分，可能由于石油醚挥发速度太快，没能有效萃取苦豆子中的生物碱；正丁醇萃取组分提取物出现1个橘红色条带，至少含有1种生物碱成分，且与氯仿萃取组分中某生物碱对应。

4　结论

通过对苦豆子应用酸水和有机醇浸渍结合超声波提取生物碱，分别用有机溶剂氯仿、正丁醇、石油醚作为萃取剂，提取生物碱用TLC检查，通过显色反应和计算Rf值比对，表明氯仿萃取组分至少含有4种生物碱成分，其中a、b分别与标准参碱、标准槐果碱和标准槐定碱对应；正丁醇萃取组分至少含有1种生物碱成分C1，且与氯仿萃取组分中某生物碱c对应，石油醚萃取组分不含生物碱成分。采取稀盐酸溶液和90%的有机醇溶剂结合超声波、有机溶剂氯仿萃取的提取方法对苦豆子植物中生物碱的提取切实可行。

［1］ 牟新利， 王宝武等. 中药苦豆子化学成分及生理活性的研究进展新疆师范大学学报（自然科学版）［J］. 2005，24（1）： 47.

［2］ 李端. 豆科植物皂荚和苦豆子抗菌化合物初步研究［D］. 中国农业大学硕士论文， 2005.

［3］ 赵宝玉. 疯草（甘肃棘豆）生物碱系统分析及其毒性的比较病理学研究［D］. 西北农林科技大学2001届博士学位论文， 2001.

［4］ 马朝阳. 苦豆子生物碱提取分离纯化研究［D］， 江南大学硕士论文. 2004：3.

S853.72+1

A

1007-1733（2015）06-0012-02