两种新剂型牛细管冻精精子质量评定

桑国俊，郭海龙，王 珂，容维中，邱忠玉（甘肃省畜牧兽医研究所，甘肃平凉744000）

两种新剂型牛细管冻精精子质量评定

桑国俊，郭海龙，王 珂，容维中，邱忠玉
（甘肃省畜牧兽医研究所，甘肃平凉744000）

对以EG和GL为冷冻保护剂的2种稀释液对牛精液冷冻保存效果进行了质量检测与分析，表明2种剂型细管冻精在总活精子数、精子复苏率、平均路径速率、曲线运动速率、直线运动速率、顶体完整率和畸形率等方面显著优于对照组，EG剂型组的效果优于GL剂型组。

甘油；乙二醇；细管冻精；精子活力

1　试验目的和要求

牛的繁殖方式包括本交和人工授精，人工授精又分鲜配和冻配，利用细管冻精进行远程和集中实施人工授精是最主要的牛群繁殖方式。因此，细管冻精的质量是确保人工授精受胎率的关键环节［1］。细管冻精的质量受供精公牛健康状况、饲养水平、精液品质、细管冻精制作环节和保存条件的影响，这些环节中除细管冻精制作外都可以进行人工标准控制和实施，而细管冻精制作环节受冷冻液、冷冻方法的影响较大［2］。常规冷冻液的冷冻保护剂为甘油和蛋黄，在应用中存在黏度过大、蛋黄脂肪颗粒大而不均匀，影响精子运动速率的问题［3～4］。因此，在此前的一系列试验中筛选出了一种黏度较小的新型冷冻保护剂及其对应的稀释液，在不影响精液冷冻效果的前提下，提高精子的运动速率，提高人工授精的受胎率［5］。本试验的目的是针对前期试验结果，对按照已经定型的配方生产的牛细管冻精进行精子质量评定，为定型配方提供科学依据。

2　试验设备和要求

主要试验设备为液氮罐、显微镜、精子图像分析仪［6］。

3　试验方法和步骤

以传统配方及其生产方法为对照组，以EG（乙二醇）和GL（甘油）为冷冻剂的2种定型配方为实

06-0060-03验组，3组各生产100枚牛细管冻精，从中各抽检10枚，测定总活精子数（total sperm count）、精子复苏率（sperm recovery rate）、活力（sperm motility）、平均路径速率（average path velocity，VAP）、曲线运 动速率（curvilinear velocity，VCL）、直线运动速率（straight line velocity，VSL）、顶体完整率（sperm acrosome integrity rate）和畸形率（sperm abnormality rate）等，测定结果用spss统计分析。

4　试验结果

4.1试验配方

本试验是对牛精液稀释液和冷冻液测定并定型的基础上实施的，根据前期项目试验结果，确定了最优组合，并在此基础上进行进一步试验测定，为配方定型提供更具说服力的数据资料。

试验配方设计见表1。EG组和GL组的基础液相同。冷冻液按照处理不同，设置了以EG为冷冻剂和以GL为冷冻剂2种处理，每个处理又分为第一液和第二液。第一液用于第一次稀释牛精液，第二液用于稀释进行平衡处理和冷冻处理的精液。

对照组传统配方为：第一液：蒸馏水100mL，柠檬酸钠2.97g，普通卵黄10mL；第二液：取第一液41.75mL，加入果糖2.5g，甘油7mL。

牛精液稀释、平衡、冷冻及保存与前期试验相同。本处不予叙述。

4.2试验结果

依照试验设计，本次测定的是已经按照定型配方和生产规程生产的牛细管冻精，随机选择EG组和GL组各10枚细管冻精，在实验室用精子图像分析仪进行总活精子数、精子复苏率、活力、平均路径速率（VAP）、曲线运动速率（VCL）、直线运动速率（VSL）、顶体完整率和畸形率等测定。测定数据统计结果详见表2。

表1　定型配方

表2　尺指标，从中选择所有一岁、二岁、

表3　试验组比对照组指标提高百分比统计

上述统计分析表明：

总活精子数：试验组和对照组均在3500万左右，差异不显著（P＞0.05）。

精子复苏率：优势序列为EG组＞GL组＞对照组。EG组比GL组低0.34%（P＞0.05），比对照组高2.8%（P＞0.05）；GL组比对照组高2.45%（P＞0.05）。

活力：优势序列为EG组＜GL组＞对照组。EG组比GL组低2.34%（P＞0.05），比对照组高% 5.33（P＞0.05）；GL组比对照组高7.86%（P＜0.05）。

平均路径速率（VAP）：优势序列为EG组＜GL组＞对照组。EG组比GL组低1.27%（P＞0.05），比对照组高3.78%（P＞0.05）；GL组比对照组高5.11%（P＜0.05）。

直线运动速率（VSL）：优势序列为EG组＞GL组＞对照组。EG组比GL组高3.22%（P＞0.05），比对照组高4.59%（P＜0.05）；GL组比对照组高1.32%（P＞0.05）。

曲线运动速率（VCL）：优势序列为EG组＞GL组＞对照组。EG组比GL组高5.34%（P＜0.05），比对照组高11.00%（P＜0.05）；GL组比对照组高5.37%（P＜0.05）。

顶体完整率：优势序列为EG组＞GL组＞对照组。EG组比GL组高0.78%（P＞0.05），比对照组高9.2%（P＜0.05）；GL组比对照组高8.36%（P＜0.05）。

畸形率：优势序列为EG组＞GL组＞对照组。EG组比GL组低6.96%（P＜0.05），比对照组低15.35%（P＜0.01）；GL组比对照组低9.01%（P＜0.05）。

5分析讨论

本次试验对牛精液冷冻保存试验中定型的两种方法进行的质量检查评定表明：

①筛选出的两种牛精液冷冻保存方法的各项质量评定指标高于对照组，特别是对受精过程影响最大的精子顶体完整率、精子畸形率、直线和曲线运动速率等指标均高于或显著高于对照组。

②两组试验组之间相比，相互之间差异不一致。关键指标（精子顶体完整率、精子畸形率、直线和曲线运动速率等）EG组高于GL组。

③小结。对于已经定型的两种牛精液的冷冻保存方法而言，EG组优于GL组，更具有推广应用价值。

［1］ 邓福金，王化青，吴庆荣.牛精液冷冻机理的探讨［J］.中国牛业科学，2013，2（39）：57-59.

［2］ 贾永宏，朱庆超，杨海涛等.牛精液冷冻保护剂研究进展［J］.家畜生态学报，2014，1（35）：5-8.

［3］ 易康乐.水牛冷冻精液稀释液配方改进的研究［D］.中国优秀硕士学位论文全文数据库，2005：1-33.

［4］ 蔡虹.牛精液冷冻稀释液新配方研究［D］.中国优秀硕士学位论文全文数据库2009：1-55.

［5］ 杨俊涛.牛精液冷冻稀释液的改进研究［D］.中国优秀硕士学位论文全文数据库2007：1-45.

［6］ 王丽云，刘玉，朱子岳等.牛冷冻精液稀释液的研究进展［J］.上海畜牧兽医通讯，2014，6（4）：15-16.

Quality Test for two Types Bovine Frozen Semen of Wheat Straw

SANG Guo-jun，GUO Hai-long，WANG Ke，RONG Wei-zhong，QIU Zhong-yu
（Gansu Institute of Animal Science and Veterinary medicine，Pingliang Gansu 744000，China）

It were studied that EG and GL as cryoprotectant had increased the thawing sperm motility for bovine frozen semen of wheat straw.The report had showed there are significant difference between group EG and group GL in total sperm count，recovery rate，motility，average path velocity，curvilinear velocity， straight line velocity，acrosome integrity rate and abnormality rate.

GL（Glycerol），EG（ethylene glycol），bovine frozen semen of wheat straw，sperm motility

S823.6

A

1001-9111（2015）

2015-04-18 修改日期：2015-04-22

甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目"EG和TCM199提高牛精液冷冻效果的关键技术研究"。

桑国俊（1963-），男，博士研究生，甘肃省临洮县人，研究员，主要研究方向为动物遗传育种与繁殖。