赭曲霉毒素A无毒ELISA检测

裘雪梅 朱立鑫 刘敏等

摘要[目的]研究赭曲霉毒素A毒素的替代ELISA检测。[方法]采用噬菌体展示技术筛选赭曲霉毒素A模拟表位，得到赭曲霉毒素A（OTA）模拟表位序列为IR（V）PMV（L）XX （X为任意氨基酸），化学合成法体外合成OTA 模拟表位肽，通过化学交联法将OTA模拟表位肽与BSA连接，做成无毒抗原，建立无毒OTA 间接竞争ELISA检测方法，同样通过化学交联法将OTA多肽-BSA与HRP 相联，建立OTA无毒直接竞争ELISA检测方法。[结果]OTA多肽-BSA间接竞争ELISA检测50%抑制浓度（IC50）为5 ng/ml，OTA多肽-BSA-HRP一步直接竞争ELISA检测法IC50为2.5 ng/ml，二步直接竞争ELISA检测法IC50为2 ng/ml。[结论]OTA模拟表位多肽能用于代替OTA毒素作为检测抗原使用，并建立无毒ELISA检测方法。

关键词赭曲霉毒素A；模拟表位；ELISA检测

中图分类号S188文献标识码

A文章编号0517-6611（2015）31-035-03

Research of Ochratoxin A Nontoxic ELISA

QIU Xuemei， ZHU Lixin， LIU Min et al

（School of Life Science， Jiangxi Science & Technology Normal University， Nanchang， Jiangxi 330013）

Abstract [Objective] To research the ELISA detection based on Ochratoxin A（OTA）mimic epitope. [Method] Screening the OTA mimic epitope from random phage display peptide library， and chemical synthesis was used to get the OTA mimic epitope， then synthesize OTA poly peptideBSA and OTA poly peptideBSAHRP， establish the methods of indirect and indirect competive ELISA. [Result] The IC50 of OTA poly peptideBSA indirect competive ELISA is 5 ng/ml， the IC50 of OTA poly peptideBSAHRP one step direct competive ELISA is 2.5 ng/ml， the IC50 of OTA poly peptideBSAHRP two step direct competive ELISA is 2 ng/ml. [Conclusion] OTA poly peptide based on OTA mimic epitope can be used to replace OTA toxin， and can establish nontoxin ELISA.

Key words Ochratoxin A； Mimic epitope； ELISA detection

赭曲霉毒素A（Ochratoxin A，OTA）是曲霉属和青霉属的某些菌种产生的有毒次级代谢产物，易蓄积于组织中[1-2]，属于烈性的肾脏和肝脏毒素[3-5]。OTA还具有强的致癌、致畸和致突变性[6-7]。产OTA毒素的菌株广泛存在于自然界中，在各种农作物、食品、饲料、人类及动物的组织和血液中均能检测到OTA的污染，对人类健康构成重大威胁[8-9]。

高效液相色谱法（HPLC）等理化分析检测方法可以精确地进行定性和定量分析[10-12]，由于所需设备昂贵、操作复杂以及对样品纯度有较高的要求，导致检测成本高、周期长，无法满足大批量样本快速筛查的需要。酶联免疫吸附分析方法（ELISA）由于具有较高的灵敏度和特异性，对样品的纯度要求不高，且操作简单，特别适合大批量样本的检测，因而被广泛应用于OTA的快速检测[13]。……