对比两种灭活剂对猪圆环病毒2型（WH株）的灭活效果

刘庆

[摘要] 通过实验观察二乙烯亚胺（Binary ethylenimine，BEI）和甲醛对猪圆环病毒2型（WH株）的灭活效果，进行对比，选择一种适用于猪圆环病毒二型（WH株）的灭活剂。在不同温度（37℃、32℃、27℃）下采用4種浓度 （0.002mol/L、0.001 mol/L、0.0005 mol/L、0.00025 mol/L）的BEI和浓度含量为2‰的甲醛对猪圆环病毒2型（WH株）进行灭活，采用间接免疫荧光法测定病毒感染性滴度。通过实验证明：在37℃条件下，0.002mol/L的BEI能在48h内完全灭活病毒。

[关键词] 猪圆环病毒2型（WH株）；二乙烯亚胺；甲醛；灭活；比较

二乙烯亚胺（Binary ethylenimine，BEI）类灭活剂的灭活原理是：通过干扰核酸代谢和破坏病毒核酸达到灭活病毒。本实验通过BEI与甲醛在灭活效果方面进行对比，对不同浓度的BEI和2‰的甲醛在不同温度下灭活猪圆环病毒2型（WH株）的效果进行观察，以比较BEI和甲醛对猪圆环病毒2型的灭活效果。

1.材料与方法，

1.1 细胞和病毒

PK-15细胞来自华中农大；猪圆环病毒2型（WH株）来自华中农大。

1.2 主要试剂

2-溴乙胺氢溴酸盐（2-Aminoethyl bromide hydrobromide，BEA）、甲醛、细胞及病毒培养基均购自Sigma公司。

1.3 病毒液的制备

将猪圆环病毒2型病毒按照标准操作规程同步接种PK-15细胞，37℃培养，收获病毒液抽样检验，样品于-20℃条件保存备用。

1.4 BEI灭活剂的配制

将BEA与0.2mol/L的NaOH溶液在37℃条件下水浴1h，配制成BEI灭活剂，4℃保存备用。

1.5 BEI和2‰的甲醛对病毒液的灭活

在病毒液中分别加入终浓度为0.002mol/L、0.001mol/L、0.0005 mol/Ll和0.00025 mol/L的BEI以及浓度含量为2‰的甲醛，分别于37℃、32℃、27℃放置12d，加入阻断剂终止灭活。每天取样，采用间接免疫荧光法测定病毒含量。

2. 结果

表1～3为不同温度条件下浓度为0.002mol/L、0.001 mol/L、0.0005 mol/L、0.00025 mol/L及浓度为2‰的甲醛对猪圆环病毒2型（WH株）的灭活效果。

2.1 灭活检测：取灭活后的病毒液100μl与PK-15细胞同步接种于96孔微量板中，置37℃下培养并观察5日，用间接荧光试验进行检测，应无阳性信号。……