溶藻弧菌转运蛋白TolB的免疫原性与免疫保护性

庞欢瑛周泽军张燕飞李静邱明生丁燏简纪常吴灶和

（1.广东海洋大学水产学院，湛江 524088；2.广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室，湛江 524088；3.仲恺农业工程学院，广州 510225）

溶藻弧菌转运蛋白TolB的免疫原性与免疫保护性

庞欢瑛1，2周泽军1，2张燕飞1，2李静1，2邱明生1，2丁燏1，2简纪常1，2吴灶和2，3

（1.广东海洋大学水产学院，湛江 524088；2.广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室，湛江 524088；3.仲恺农业工程学院，广州 510225）

旨在研究溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）HY9901转运蛋白TolB作为疫苗候选抗原的可能性，根据已发表的全基因组序列，设计特异性引物PCR扩增tolB的基因全长序列。序列分析显示，该基因（GenBank登录号JQ846501）全长1 353 bp，共编码450个氨基酸残基。BLAST分析发现，溶藻弧菌tolB基因与其他已知弧菌的tolB具有较高的同源性，序列保守，可作为共同抗原候选蛋白。用原核表达的tolB蛋白免疫SPF级小鼠，制备多克隆抗体，ELISA效价达1∶40 000。免疫印迹表明鼠抗tolB血清能与诱导后的重组蛋白发生特异反应。为进一步研究tolB对石斑鱼（Epinephelus awoara）的免疫保护性，用TolB蛋白两次免疫石斑鱼，ELISA 检测发现，免疫石斑鱼血清的抗体效价在第4周达到峰值（1∶2 048）。攻毒实验结果表明TolB对石斑鱼的免疫保护率为76%。结果表明，溶藻弧菌转运蛋白TolB具有较好的免疫原性和免疫保护性，可作为弧菌亚单位疫苗的候选抗原。

溶藻弧菌；tolB基因；免疫原性；免疫保护

溶藻弧菌是一种嗜盐嗜温性、兼性厌氧的革兰氏阴性短杆菌，广泛分布于世界各地，是水生动物弧菌病的主要病原菌之一［1-3］。……