视黄酸刺激RARE调控荧光素酶报告基因表达系统的构建与应用

袁源 陈亚琼

（中国科学院上海生命科学研究院营养科学研究所，上海 200031）

视黄酸刺激RARE调控荧光素酶报告基因表达系统的构建与应用

袁源 陈亚琼

（中国科学院上海生命科学研究院营养科学研究所，上海 200031）

类维生素A，通过视黄酸（retinoic acid，RA）代谢旺盛组织的靶基因调控，与生物节律通路相互作用，在代谢性疾病发展过程中发挥着重要作用。在293T及小鼠肝原代细胞中，构建视黄酸反应元件（RARE）调控的荧光素酶报告基因表达系统，为研究类维生素A与节律和代谢研究中靶基因上游调控信号分子提供可能。用定点突变PCR方法在pGL3-Basic载体中插入RARE片段，检测报告基因表达及RARE对视黄酸响应的半数有效浓度（EC50），初步筛选可能调控RARE的靶基因，通过酶切连接将荧光素酶报告基因Luciferase和启动子RARE片段构入穿梭载体pShuttle，转入感受态细胞BJ518获得重组腺病毒载体Ad-Basic-RARE-Luc，转染MGH细胞并进行扩增，在小鼠肝原代细胞检测腺病毒活性。结果显示，构建的RARE调控的荧光素酶报告基因表达载体在293T细胞可被RA刺激，RARβ促进RA刺激RARE表达，而CRY1抑制RARE-Luc对RA的响应，并成功构建了在小鼠肝原代细胞响应RA刺激的Adeasy-Basic-RARE-Luc腺病毒载体。

视黄酸；RARE；荧光素酶报告基因；节律；代谢

类维生素A，包括视黄醇及其衍生物［1］，调控着细胞的分化、增殖与凋亡［2］。近年来研究表明，在代谢性疾病发展过程中，类维生素A发挥着重要作用。类维生素A通过调控靶基因表达进而调节哺乳动物的糖脂代谢，被认为是糖尿病，肥胖等重要的治疗靶点。报道称RA过量会引起小鼠体重减轻，白色脂肪减少［3，4］，改善小鼠胰岛素敏感性［4］。……