pfs基因原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

孟祥晨，杨　杰，赵日红，胡子毅

（东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨150030）

pfs基因原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

孟祥晨，杨杰，赵日红，胡子毅

（东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨150030）

以植物乳杆菌KLDS1.0391的基因组DNA为模板，采用PCR方法扩增得到pfs基因，与GenBank中的序列对比发现同源性为99%。将目的基因与表达载体pQE-30连接，并将重组质粒pQE-30-pfs转化到E.coli M15中。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达重组蛋白，经SDS-PAGE分析，在全菌体蛋白中含有一条明显的特异性蛋白条带，大小约为27.4ku。经Ni-NTA纯化系统纯化后，在SDS-PAGE凝胶电泳图上获得纯化产物的条带。结果表明，原核表达载体pQE-30-pfs构建成功，且Pfs蛋白在大肠杆菌中成功表达，采用Ni-NTA纯化系统成功纯化了重组蛋白Pfs，为体外合成AI-2（Autoinducer-2）奠定了基础。

pfs基因，重组质粒，诱导表达，重组蛋白Pfs

细菌中存在各种小分子物质介导的胞内、胞外信号传递，细菌通过各种小分子物质感知胞外的环境和胞内的生理状态，进而对感知到的变化做出针对性的反应［1］。群体感应是细菌胞外信号传递的主要方式之一，是细菌之间信息交流机制的一种。细菌可以产生一种被称为自诱导物（autoinducers，AI）的信号分子，信号分子从胞内扩散到胞外，其浓度随菌体密度而改变，细菌通过检测信号分子的浓度来监测环境中种间、种内的细菌群体密度以及所处的环境状况，并调控相对基因的表达［2-3］。根据细菌合成的信号分子和感应机制不同，群体感应系统（quorum sensing system，QS系统）主要分为三种：革兰氏阴性菌的AHL-LuxI/LuxR系统，革兰氏阳性菌的寡肽类信号分子介导的双组份系统，以及存在于革兰氏阳性和阴性菌中的LuxS/AI-2依赖性QS系统［4-6］。……