HPLC法测定新伤止痛颗粒中盐酸小檗碱含量

程培秀郑万景李 建周小力魏银贵张 彬

（1.四川省雅安市食品药品检验所，四川 雅安 625000；2.四川省雅安市名山区中医医院，四川 雅安 625000；3.雅安三九药业有限公司，四川 雅安 625000）

HPLC法测定新伤止痛颗粒中盐酸小檗碱含量

程培秀1郑万景2李 建1周小力1魏银贵1张 彬3

（1.四川省雅安市食品药品检验所，四川 雅安 625000；2.四川省雅安市名山区中医医院，四川 雅安 625000；3.雅安三九药业有限公司，四川 雅安 625000）

目的 建立高效液相色谱（HPLC）法测定新伤止痛颗粒中盐酸小檗碱含量。方法 采用反相HPLC法，色谱柱为phenomenex Gamini-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-0.033moL/L磷酸氢二钾溶液（38∶62），检测波长为345 nm，流速1.0mL/min，柱温35℃。结果 盐酸小檗碱进样量在0.01184～0.1776μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.99996），平均加样回收率为98.01%，RSD=1.83%（n=6）。结论 该方法操作简单、准确、重现性好，可用于新伤止痛颗粒中盐酸小檗碱的含量测定。

新伤止痛颗粒 盐酸小檗碱 HPLC法

新伤止痛颗粒为雅安市名山区中医医院院内制剂，由黄柏、当归、川芎、赤芍等多味中药组成。临床上有活血化瘀、舒筋活络、理气消肿止痛功效。临床用于治疗骨折、脱位和急性软组织损伤所致的肿胀、疼痛、功能障碍等疾病。新伤止痛颗粒主药为黄柏，其中盐酸小檗碱为黄柏主要有效成分，为确保疗效和安全性，结合该制剂的组分特点［1］，笔者参照有关文献［2-11］，建立了高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量。现报告如下。

1 仪器与试药

美国Agilent1260型高效液相色谱仪，DAD检测器；AS5150A型超声波清洗器 （天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；BP211D电子天平 （德国赛多利斯公司）；UPT-Ⅱ-10T超纯水机（成都超纯科技有限公司）。

盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208）；新伤止痛颗粒样品及阴性对照样品由名山区中医医院（样品批号为101018、110209、110214）提供。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：phenomenex Gemini-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.033mol/L磷酸氢二钾（38∶62）；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；检测波长：345 nm；进样量：10μL；理论塔板数：按盐酸小檗碱峰计不低于3000。

2.2 对照品溶液制备 精密称取盐酸小檗碱29.60mg，置100mL容量瓶中，加盐酸-甲醇（1∶100）溶解并稀释至刻度。再从中精密量取2～50mL容量瓶中，加盐酸-甲醇（1∶100）至刻度，即制成11.84μg/mL的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 取样品约1g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入盐酸-甲醇（1∶100）溶液适量，超声处理40min，放冷，滴加盐酸-甲醇（1∶100）溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。按处方比例制备不含黄柏的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液（由雅安市名山区中医医院提供）。

2.4 专属性试验 取2.2、2.3项下的3种溶液，按拟定的色谱条件分别进样测定，记录色谱图，结果见图1。从图中可见，供试品溶液色谱在与盐酸小檗碱对照品相应保留时间有一致的色谱峰，阴性对照品溶液无干扰。

图1高效液相色谱图

2.5 线性关系考察 精密吸取盐酸小檗碱对照品（11.84μg/mL）溶液1、2、5、8、10、15μL，依次进样，记录峰面积。以进样量X（μg）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=3.5165×103X-1.84037，r=0.99996（n=6）。结果表明，盐酸小檗碱进样量在0.01184～0.1776μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取盐酸小檗碱对照品（11.84μg/mL）溶液，重复进样6次，测定，峰面积的RSD为0.3%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性考察 取同一供试品溶液，室温下放置，精密吸取10μL，每隔2 h测定1次，24 h内共测12次，测定其峰面积，RSD为0.8%。结果表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。

2.8 重复性试验 取同一批样品6份，制备供试品溶液，进样，分析，结果样品峰面积的RSD为0.9%，表明本试验条件下重现性较好。

2.9 回收率试验 取已知含量供样品（含量为0.365mg/g）6份，分别精密加入对照品溶液（0.2960mg/mL）3mL，再按2.3项下方法制备溶液。见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

2.10 样品含量测定 取样品3批，测定其含量。结果含量分别为0.365、0.414、0.409mg/g。

3 讨 论

根据文献［2-3］，分别考察265、345 nm波长处测得的色谱峰，结果发现345 nm处峰形好，与杂质峰分离完全。

对流动相乙腈-0.033moL/L磷酸氢二钾的不同比例进行了考察，结果以乙腈-0.033moL/L磷酸氢二钾（38∶62）为最佳，基线平稳，盐酸小檗碱的色谱峰分离最好，峰形最好。

分别考察了超声20、30、40、60min的提取效率，结果超声40min提取完全，故确定其超声40min。

本文建立了对新伤止痛颗粒中盐酸小檗碱的HPLC法，该方法简便、准确、重现性好，可用于提高该制剂的质量标准。

［1］曾永琼.新伤止痛颗粒配制工艺探讨［J］.北方药学，2014，11（4）：59.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：化学工业出版社，2010：438，465，923.

［3］余志刚，程培秀.金鸡颗粒中药材的鉴别与盐酸小檗碱的测定［J］.华西药学杂志，2010，25（1）：90-91.

［4］高咏，孙征刚，许珊.反相液相色谱法测定乳癖安消片中盐酸小檗碱的含量［J］.中国药业，2010，19（18）：37.

［5］陈进，王国凯，刘劲松.HPLC法测定炎可宁片中盐酸小檗碱的含量［J］.安徽医药，2007，11（9）：790-791.［6］乐辉.HPLC法测定盐酸黄连素溶液中盐酸小檗碱的含量［J］.中国药师，2009，12（4）：541-542.

［7］李小燕.HPLC法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量［J］.中成药，2002，24（9）：678-680.

［8］张前珍，吴增宝.高效液相色谱法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量［J］.安徽医药，2006，10（11）：841-842.

［9］高鹏，王晓南，韦霞.高效液相色谱法测定一清颗粒中盐酸小檗碱的含量［J］.白求恩军医学院学报，2008，6（3）：179-180.

［10］彭宣灏，吴和珍，冯海清，等.高效液相色谱法测定痛风舒宁片中盐酸小檗碱的含量［J］.湖北中医药大学学报，2013，15（2）：31-32.

［11］唐春发.高效液相色谱法测定胃康宁片中盐酸小檗碱的含量［J］.医药导报，2005，24（8）：731-732.

D etermination of Berberine Hydrochloride Content in Xinshangzhitong Granule by HPLC

CHENG Peixiu1，ZHENG WanJing2，LI Jian1，et al. 1 Ya′an Institute for Food and Drug Control，SiChuan Province，Sichuan，Ya′an 625000，China；2 Mingshan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Ya′an City，Sichuan Province，Sichuan，Ya′an 625000，China

【Abstrac】Objective：To establish a method for determining berberine hydrochloride content in Xinshangzhitong Granule by HPLC.Methods：Berberine hydrochloride was analyzed by using Phenomenex Gamini-C18column（250mm×4.6mm，5μm）with the mobile phase of acetonitrile-0.033mol/L dipotassium hydrogen phosphate（38∶62）at the flow rate was 1.0mL/min.The detection wavelength was 345 nm and the column temperature was 35℃.Results：The linear of berberine hydrochloride was in the range of 0.01184～0.1776μg（r=0.99996）.The average recoveries were 98.01%with RSD of 1.83%（n=6）.Conclusion：The method is simple，reliable and accurate.It can be used for the determination of berberine hydrochloride content in Xinshangzhitong Granule.

Xinshangzhitong Granule；Berberine hydrochloride；HPLC

R289.5

A

1004-745X（2015）05-0803-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.05.018

2015-01-05）

四川省雅安市中医重点建设专科