HPLC法测定胃疡宁丸中乌药醚内酯的含量

李诗慧 何广俊 卢 映 廖丰蕴 王利胜* 陈辉清

（1 广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006；2 广东省中医院药学部，广东 广州 510120）

胃疡宁丸由乌药、白术、白及、山药等药材组成，具有温中散寒，理气止痛，制酸止血功效，用于胃脘胀痛或刺痛，呕吐泛酸。其原标准[1]中仅具有显微鉴别和沉淀反应鉴别，内容简单，很难有效的控制其内在质量，乌药为处方中的君药，且乌药醚内酯为乌药中的有效成分，故本文采用高效液相法对该药中乌药醚内酯进行含量测定。结果表明本方法精密度、重复性、稳定性均较好，结果可靠，可用于胃疡宁丸质量标准的定量分析。

1 仪器和试药

1.1 仪器：KQ5200DE型数控超声清洗器，江苏省昆山市超声仪器有限公司；Waters高效液相色谱仪（515泵，2487紫外检测器），美国waters公司；N3000色谱工作站，浙江大学；AUW120电子分析天平（SHIMADZU公司）。

1.2 试药：乌药醚内酯对照品（1568-200601，中国药品生物制品检定所）；乙腈(色谱纯，DIKMA TECHNOLOGIES INC)；甲醇(色谱纯，DIKMA TECHNOLOGIES INC)；胃疡宁样品（批号：EK1151、FL1061、FL1081，由陈李济公司提供）；甲醇和乙醚为色谱纯；水为高纯水；阴性样品自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件。色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）柱；流动相：乙腈-水(56∶44)；检测波长为235 nm；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：20 μL，理论板数按乌药醚内酯峰计算不低于2000。

2.2 供试品溶液制备：精密称取本品2 g，加入硅藻土4 g，研匀，置具塞锥形瓶中，加入乙醚80 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用乙醚补足减失的重量，挥干乙醚，加甲醇定容至5 mL，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备：精密称取乌药醚内酯对照品适量，加甲醇制成每1 mL含乌药醚内酯0.08 mg的溶液，即得。

2.4 乌药阴性对照溶液的制备：按处方中药味的比例，按其工艺制成乌药阴性对照样品，再按供试品溶液的制备方法制备乌药阴性对照溶液。

2.5 线性关系的考察：精密称取乌药醚内酯对照品1.8 mg，分别置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为180 μg/mL的储备液；取上述乌药醚内酯储备液加甲醇分别制成浓度为0.45、9、18、36、90 μg/mL的系列标准溶液，各进样20 μL，以峰面积Y为纵坐标，以进样量(μg)X为横坐标，绘制标准曲线。乌药醚内酯的线性回归方程为：Y=37776X+25857，r＝0.9995，乌药醚内酯在0.018～3.6 μg质量范围内呈良好的线性关系。

2.6 专属性考察：在上述色谱条件下，将胃疡宁丸供试品溶液、乌药醚内酯对照品、阴性对照溶液，分别进样20 μL，得液相图谱，显示阴性对照无干扰，理论塔板数不低于2000，结果见图1。

2.7 精密度实验：精密吸取同一份对照品溶液，连续进样5次，结果峰面积的RSD为0.5486%，n=5。精密度良好，结果表明仪器精密度良好。

2.8 重复性实验：取样品（批号EK1151）6份，按“供试品溶液的制备”方法制备样品溶液，测定乌药醚内酯平均含量为2.18 μg/g，RSD为3.5%（n=6）。结果表明，方法的重复性良好，适合含量测定的要求。

2.9 稳定性试验：取重复性试验中的1号样品，分别于第0，2，4，6，8，10进样，每次20 μL，记录峰面积，求峰面积RSD，RSD=1.00%（n=6），结果显示，在10 h内，样品稳定。

2.10 加样回收率试验：取胃疡宁丸样品（批号EK1151）6份，每份精密称取0.5 g，加入4倍量硅藻土研匀，精密称取2.5 g，置具塞锥形瓶中，称定重量，依次分别每组添加乌药醚内酯对照品溶液（80 μg/mL）15 μL，依法制成供试品溶液，按色谱条件测定，计算回收率。结果显示，该方法加样回收率在95%～105%，符合《中国药典》要求。

2.11 样品含量测定取胃疡宁7批，分别依法测定，测定结果为：批号EK1151，含量均值为2.177 μg/g，RSD含量2.62%；批号FL1061，含量均值为2.284 μg/g，RSD含量2.82%；批号FL1081，含量均值为2.544 μg/g，RSD含量1.04%。

3 结果与讨论

图1 乌药醚内酯的HPLC图（A.乌药醚内酯对照品；B.阴性对照品；C.样品（EK1151）；1.乌药醚内酯）

3.1 供试液制备方法的选择：《中国药典》2010年版一部乌药项下供试品溶液的制备方法为索氏提取4 h[2]。查阅文献[3-5]可知：在制剂的乌药醚内酯含量测定中超声提取处理的方法也经常使用，本文比较了以上两种方法，结果表明，两种方法提取液中乌药醚内酯含量分别为1.27 μg/g和1.28 μg/g，超声提取比回流提取的提取效率更优，且超声提取操作简单、稳定，故选择超声提取法作为提取方法。本实验还对超声提取时间（15、30、45 min）进行了考察，结果表明，超声提取30 min乌药醚内酯已经提取完全，故选择30 min作为提取时间，最终确定上述供试液制备方法。

3.2 乌药醚内酯可溶于乙醚，且高效液相色谱图证明阴性无干扰，因此可用乙醚超声处理样品，因此可用此方法提取乌药醚内酯。此外，通过线性考察、精密度试验、加样回收试验等一系列方法学考察，证明该高效液相方法简便、准确、快速、重现性好，可作为胃疡宁丸的含量测定的方法。

[1]中华人民共和国卫生部.中药成方制剂药品标准.胃疡宁丸[S].WS3-B-3935-98.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2010:71.

[3]左美玲,欧阳荣,皮晓华,等.乌药不同炮制品中乌药内酯含量测定[J].中国医药指南,2010,8(2):43-44.

[4]张剑,彭金年,占丰军.赣南乌药中乌药醚内酯不同提取方法的比较研究[J].赣南医学院学报,2013,33(6):819-820.

[5]余志华,文晓柯,吴雅莉.不同产地和采收时间乌药药材中有效成分的含量测定[J].中南药学,2013,11(7):541-544.