凤台县主要蔬菜病毒的dot—ELISA检测研究

田学飞++江彤++许起言

摘要 利用dot-ELISA法检测了安徽省凤台县蔬菜产区茄科、葫芦科和豆科蔬菜中5种主要病毒（TSWV、TMV、CMV、CGMMV和BBWV）的带毒率，检测结果发现，5种病毒的带毒率分别为1.52%、13.64%、31.89%、54.32%和20.39%。CMV与CGMMV和BBWV分别存在复合侵染现象，复合侵染率分别为29.63%和50.00%。另外，辣椒、瓜类和豇豆带毒率较高，菜豆未检出病毒。本研究结果可为凤台县蔬菜主要病毒病的综合防治提供重要的理论依据。

关键词 蔬菜病毒；dot-ELISA；检测；安徽凤台

中图分类号 S436.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）17-0149-02

Study on Dot-ELISA Detection of Major Viruses on Vegetables in Fengtai County

TIAN Xue-fei 1 JIANG Tong 2 XU Qi-yan 1 *

（1 Fengtai Vegetable Production and Marketing Office，Fengtai Anhui 232100； 2 School of Plant Protection，Anhui Agricultural University）

Abstract Five major viruses（TSWV，TMV，CMV，CGMMV and BBWV）infecting Solanaceae，Cucurbitaceae and Leguminosae vegetables in Fengtai County were detected by dot-ELISA.The results demonstrated that the positive rate of 5 viruses was 1.52%，13.64%，31.89%，54.32% and 20.39% respectively.It could be found that the phenomen of CMV and CGMMV，CMV and BBWV complex infection occurred in the vegetable fields，and the rates of complex infection are 29.63% and 50.00%.Moreover，virus-carrying rates of pepper，melon and asparagus bean are relatively high，and virus could not be detected in bean.This reseach will provide important theoretical basis for integrate control of major virus diseases of vegetables in Fengtai County.

Key words virus in vegetables；dot-ELISA；detection；Fengtai Anhui

侵染各类蔬菜的植物病毒种类繁多，主要有番茄斑萎病毒（TSWV）、烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）和菜豆萎蔫病毒（BBWV）等[1-2]。蔬菜病毒病的症状有蕨叶、明脉、矮化、黄化、坏死、畸形等[3-4]。一种病毒可以侵染多种蔬菜，多种病毒也可复合侵染一种蔬菜[5]。蔬菜生产中，无论是露天种植还是大棚栽培，因受病毒危害造成的减产减收，甚至绝收现象普遍发生，在防治过程中尽管多方采取措施，还是收效甚微[6-7]。

近几年，由于凤台县蔬菜种植结构调整、气候条件变化和栽培管理粗放等，凤台县主要蔬菜辣椒、番茄、黄瓜、酥瓜、豇豆等病毒病发生极其严重，给凤台县蔬菜生产造成巨大损失，影响了该县“菜篮子”工程建设。因此，熟悉病毒病的特性、了解病毒病的规律，对于防治十分必要[8]。而目前凤台县蔬菜病毒种类、病毒的变异、发生与分布、病害循环和流行规律等缺乏系统研究，特别是主要蔬菜病毒种类不清、发生分布与流行规律不明，造成蔬菜病毒病的防治工作非常被动，无法根据凤台县蔬菜产区的实际情况因地制宜地制定有效的防控措施。因此选择茄科的辣椒、番茄等，葫芦科的黄瓜等，豆科蔬菜的菜豆等，普查严重威胁凤台县主要蔬菜生产的5种代表性病毒，从源头上进行技术创新，为建立凤台蔬菜病毒病综合防控技术体系奠定基础，可望对凤台乃至安徽省蔬菜产业的稳定发展提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样本来源。蔬菜样本采自凤台县关店、丁集和桂集3个乡镇蔬菜集中种植区的茄科、葫芦科和豆科蔬菜。每个乡镇选定2块田，每个田块之间的距离1 000 m以上。采取双对角线五点取样法，每个乡镇每种蔬菜每块田的样品采集总量为10个以上。

1.1.2 试剂。硝酸纤维素膜购自Amersham 公司；5种病毒TSWV、TMV、CMV、CGMMV和BBWV的抗血清由浙江大学生物技术研究所惠赠；HRP-羊抗鼠IgG购自武汉博士德生物工程有限公司；显色液购自Promega公司；96孔酶标板购自美国Corning公司；其他试剂均为购自国药生物公司的分析纯。

1.2 试验方法

称取0.1 g植物叶片，按重量体积比1∶10（g/mL）加入0.01 mol/L PBS研磨；12 000 r/min离心3 min；取1 μL上清液点到硝酸纤维素膜上，室温干燥10 min；将膜浸入封闭缓冲液稀释的一抗血清中，37 ℃孵育30～60 min；洗膜3～4次，再将膜转入封闭缓冲液稀释的二抗血清中，37 ℃孵育60 min；洗膜5～6次，膜用滤纸吸干，放在培养皿底部，滴加显色液显色，拍照统计结果。endprint

2 结果与分析

2.1 主要蔬菜病毒病发病率

从表1可以看出，关店、丁集和桂集3个乡镇的蔬菜病毒病发生较为普遍，辣椒、番茄、黄瓜和豇豆的发病率较高，达10%～30%，南瓜的发病率较低，菜豆的发病率为0。

2.2 病毒dot-ELISA检测结果

dot-ELISA检测结果显示（表2），TMV、TSWV、BBWV、CMV和CGMMV的带毒率分别为13.64%、1.52%、20.39%、31.89%和54.32%。

2.3 蔬菜病毒复合侵染分析

从表3可以看出，CMV和CGMMV及CMV和BBWV均存在复合侵染现象，复合侵染率分别为29.63%和50.00%。

2.4 主要蔬菜带毒率

凤台县主要蔬菜为辣椒、番茄、黄瓜、南瓜、菜豆和豇豆等。从表4可以看出，辣椒样本TMV、TSWV、BBWV和CMV的带毒率分别为35.14%、0、0和2.70%，番茄样本TMV、TSWV、BBWV和CMV的带毒率分别为0、3.70%、0和0，黄瓜样本CMV和CGMMV的带毒率分别为82.00%和75.00%，南瓜样本CMV和CGMMV的带毒率分别为60.00%和34.50%，菜豆样本BBWV和CMV的平均带毒率分别为16.00%和0，豇豆样本BBWV和CMV的带毒率分别为80.77%和73.08%。

3 结论与讨论

本研究普查了凤台县主要蔬菜病毒病发病率，发现3个乡镇的蔬菜病毒病发生较为普遍，辣椒、番茄、黄瓜和豇豆的发病率较高，南瓜发病率较低，菜豆未检出病毒。血清学方法检测了凤台县蔬菜样本中5种病毒TMV、TSWV、BBWV、CMV和CGMMV的带毒率。结果发现，CGMMV的带毒率最高，说明CGMMV的发生非常普遍，为凤台县蔬菜主要病毒，采样时发现有黄瓜地严重受害，大部分植株表现出花叶症状。TSWV的带毒率最低，说明TSWV发生较少，为凤台蔬菜次要病毒。另外，CMV与CGMMV和BBWV均存在复合侵染现象，复合侵染发生频繁。

从凤台县主要蔬菜带毒率可以看出，辣椒、瓜类和豇豆带毒率较高，与高发病率有一定的相关性。但番茄带毒率很低，与高发病率差异较大，可能是大部分番茄发病为番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）侵染，本次试验没有检测。

由于凤台县蔬菜种植结构调整、气候条件变化和栽培管理粗放型，导致凤台县蔬菜病毒病的发生越来越严重。因此，本研究提供了凤台县蔬菜产区病毒分布特点和发病情况，为凤台县蔬菜产业稳定发展的技术保障，也为建立凤台县蔬菜病毒病综合防控技术体系奠定了基础。应因地制宜采取“预防为主，综合防治”的可持续发展方针和策略，科学管理和控制凤台县蔬菜病毒病的发生和危害。

4 参考文献

[1] 杨会房，阮涛，包凌云，等.四川省攀西地区南瓜、甜菜和辣椒部分病毒种类的ELISA检测[J].中国蔬菜，2011（16）：91-94.

[2] 安德荣，孙现超，阳浩楠，等.几种葫芦科蔬菜病毒病的鉴定及药剂防治研究[J].西北植物学报，2003，23（12）：2204-2206.

[3] 陈迎春.蔬菜病毒病识别及综合防治技术[J].现代农业，2013（7）：42.

[4] 蔡连卫，李强，刘吉元，等.豆科蔬菜主要病害发生特点及综合防治措施[J].安徽农学通报，2010，16（24）：87-88.

[5] 程乐庆.蔬菜病毒病的分析与探讨[J].农家参谋·种业大观，2011（10）：40-41.

[6] 杨林贵.甘南州蔬菜病毒病重发原因及防治对策[J].甘肃科技，2008，24（22）：181-182.

[7] 王信群，赵跃，高金付.合肥市主要蔬菜病虫害调查及测报办法[J].安徽农业科学，2007，35（22）：6858-6859.

[8] 李淑荣，刘玉军.简述夏季蔬菜病毒病的防治方法[J].农林科研，2011（14）：223-224.endprint