益心酮片对酒精性肝损伤大鼠SOD和MDA的影响

路佳宾，张守柱，崔 策，高 旗，李素婷☒

（1.承德医学院2011级临床医学本科，河北承德 067000；2.承德医学院2012级麻醉学本科；3.指导教师）

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益心酮片对酒精性肝损伤大鼠SOD和MDA的影响

路佳宾1，张守柱1，崔 策2，高 旗2，李素婷3☒

（1.承德医学院2011级临床医学本科，河北承德 067000；2.承德医学院2012级麻醉学本科；3.指导教师）

益心酮；大鼠；酒精性肝损伤；SOD；MDA

肝脏是酒精代谢的主要场所，长期饮酒或短期内反复大量饮酒会引起酒精性肝损伤［1］。在我国消费人群中酒精的摄入量不断增加，由酒精所致的肝损伤呈逐年上升趋势，酒精已成为继病毒性肝炎后导致肝损伤的第一大病因。研究表明，氧化应激存在于酒精性肝损伤全过程，并发挥非常重要作用［2］。天然植物抗氧化剂可通过多靶点、多途径及协调作用等机制，在抑制氧化应激，减少酒精性肝损伤方面具有一定的应用价值［3］。山楂叶总黄酮是一种天然的植物提取物，因富含黄酮类成分而具有明显的清除自由基、抗氧化作用［4］。山楂叶总黄酮制剂-益心酮片作为降血脂、预防心脑血管供血不足用药已应用于临床［5］。本研究主要观察益心酮片对酒精所致大鼠肝脏氧化应激损伤的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：SPF级健康雄性SD大鼠60只，体重180± 20g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：scxk（2007-2009）。适应性饲养1周后进行实验，实验期间自由饮水，进食普通饲料。

1.1.2 药品与试剂：益心酮片（山楂叶总黄酮制剂，每片含山楂叶总黄酮32mg），山西振东泰盛制药有限公司； 56%红星二锅头白酒，北京红星酿酒厂；丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.1.3 主要仪器：半自动生化分析仪（MD-100），美国Bayer公司；721W微机型分光光度计，上海光学仪器五厂；Olympus显微镜和组织切片机，德国Leica公司。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药：SD雄性大鼠60只，随机分为正常对照组、酒精模型组、益心酮低、高剂量组，每组15只。正常对照组每天给予蒸馏水0.4ml灌胃，其余3组每天上午按16 mg/kg/d剂量灌胃56%红星二锅头白酒，连续灌胃4周，制备亚急性酒精性肝损伤模型。自造模第一天起，益心酮低、高剂量组在每天灌胃白酒1h后灌胃益心酮片（用蒸馏水溶解成混悬液，相当于山楂叶总黄酮100、200mg/kg），对照组和模型组灌服等体积蒸馏水，实验期间各组大鼠自由饮水、进食。最后一次灌胃结束后，禁食不禁水16h后处死大鼠。

1.2.2 大鼠体重和肝指数的测定：实验开始前称大鼠体重，实验结束处死前称大鼠体重，剖腹取肝脏称其湿重，计算肝指数（肝指数=肝湿重/体重×100%）。

1.2.3 血清ALT、AST测定：取血分离血清，用半自动生化分析仪测定ALT、AST活性。

1.2.4 肝匀浆MDA、SOD测定：取部分肝脏，用冷生理盐水冲洗后制备成10%的肝匀浆，按试剂盒说明书测定肝组织MDA含量及SOD活性。

1.2.5 肝脏病理学检查：取大鼠部分肝组织，10%甲醛溶液常规固定，石蜡包埋、切片，HE染色，光学显微镜下观察肝组织病理学变化。1.2.6 统计分析：用SPSS17.0软件进行统计学分析，数据以（±s）表示，各组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用SNK法，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 益心酮对酒精性肝损伤大鼠肝指数变化的影响 正常组大鼠毛色光亮，活动自如，饮食正常，体重增加，无死亡现象；模型组大鼠毛色发黄，活动较少，精神萎靡，饮食减少，大便稀溏，体重下降；益心酮低、高剂量保护组大鼠一般情况均好于模型组。与对照组比较，模型组大鼠肝指数明显升高（P＜0.05）。与模型组比较，益心酮组大鼠肝指数均明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1：

表1 益心酮对大鼠肝指数变化的影响（±s，n=15）

表1 益心酮对大鼠肝指数变化的影响（±s，n=15）

与对照组比较：*P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05

组别 剂量（mg/kg） 体重（g） 肝湿重（g） 肝指数（%）对照组 - 328.00±61.67 8.32±0.19 2.25±0.13模型组 - 257.00±1.045 8.74±1.66 3.74±0.38*益心酮低剂量组 100 249.70±28.49 7.67±0.84 2.82±0.27#益心酮高剂量组 200 269.33±16.80 8.04±0.44 2.37±0.19#

2.2 肝组织病理学变化 各组大鼠肝组织HE染色后光镜下观察，正常组：肝小叶结构清晰，肝细胞形态正常，肝索排列整齐，肝组织无明显脂肪变性，肝小叶内未见肝细胞坏死及淋巴细胞浸润（图1）；酒精模型组：肝小叶结构不清，肝细胞弥漫性肿胀，有片状脂肪样变性，并有点状或灶状坏死（图2）。益心酮治疗组：肝小叶结构基本保留，肝细胞轻度水肿，脂肪样变性细胞明显减少，肝小叶内有少量点状坏死及淋巴细胞浸润（图3-4）。

图1 正常组（HE×200）

图2 模型组（HE×200）

图3 益心酮低剂量组（HE×200）

图4 益心酮高剂量组（HE×200）

2.3 益心酮对酒精性肝损伤大鼠血清ALT、AST活性的影响与正常对照组比较，模型组大鼠血清ALT、AST活性均显著升高（P＜0.05），与模型组相比，益心酮低、高剂量组大鼠血清ALT、AST活性明显降低（P＜0.05）。表明益心酮能够保护大鼠肝细胞、稳定细胞膜的结构，对酒精性肝损伤具有一定的保护作用。见表2：

表2 益心酮对大鼠血清ALT、AST活性的影响（±s，n=15）

表2 益心酮对大鼠血清ALT、AST活性的影响（±s，n=15）

与对照组比较：*P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05

组别 剂量（mg/kg） ALT（U/L） AST（U/L）对照组 - 69.88±9.40 135.50±25.33模型组 - 120.00±13.57*524.04±28.76*益心酮低剂量组 100 112.38±13.04#340.25±27.62#益心酮高剂量组 200 103.25±10.14#248.75±29.50#

2.4 益心酮对肝组织MDA含量、SOD活性的影响 与正常对照组比较，模型组大鼠肝匀浆MDA含量明显升高，SOD活性明显降低（P＜0.05）；与模型组相比，益心酮两个剂量组均可降低大鼠肝匀浆MDA含量，升高SOD活性（P＜0.05）。表明益心酮可提高内源性抗氧化酶活性，清除自由基抗脂质过氧化，抑制酒精性肝损伤大鼠的氧化应激反应。见表3：

表3 益心酮对大鼠肝脏MDA含量、SOD活性的影响（±s，n=15）

表3 益心酮对大鼠肝脏MDA含量、SOD活性的影响（±s，n=15）

与对照组比较：*P＜0.05；与模型组比较：#P＜0.05

组别 剂量（mg/kg） MDA（nmol/mgprot） SOD（U/mgprot）对照组 - 3.26±2.12 19.11±1.82模型组 - 9.42±1.97*14.71±1.96*益心酮低剂量组 100 5.64±1.78#17.74±1.12#益心酮高剂量组 200 4.03±2.63#18.43±1.71#

3 讨论

目前认为氧化应激是导致酒精性肝损伤的一个重要原因［6］。大量饮酒后，酒精在肝脏经肝微粒体乙醇氧化系统（MEOS）代谢产生大量自由基（如：O2-・、OH-・、H2O2等），这些自由基具有极强氧化能力，可攻击肝细胞膜多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，破坏细胞膜和细胞器结构，改变生物膜流动性和通透性，影响DNA和蛋白质的结构和功能，最终导致肝细胞广泛损伤［7］。机体在代谢酒精时会启动内源性抗氧化系统来干预氧化应激损伤，SOD是清除活性氧自由基的主要的抗氧化酶，它可将氧自由基歧化为H2O2，H2O2进一步在过氧化氢酶、GSH-Px催化下被清除，保护肝细胞免被损伤。但是大量摄入酒精时，酒精可引起肝细胞内抗氧化物质（维生素E、C、A）明显减少，进而导致SOD活性下降，不能有效清除自由基，致使自由基在体内蓄积超过了体内抗氧化酶代谢能力，导致细胞膜发生脂质过氧化反应，对肝细胞造成损伤［8］。因此检测肝组织中SOD活性可以衡量肝脏清除自由基能力及抗氧化能力。MDA是自由基与细胞膜多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的代谢终产物，其含量与氧自由基含量及脂质过氧化程度相平行，是反应体内脂质过氧化水平的敏感指标，检测MDA含量可衡量细胞脂质过氧化损伤的程度［9］。

本研究结果显示，大鼠灌胃56°白酒4周后，模型组大鼠血清ALT、AST活性明显升高，肝组织有脂肪样变和灶状坏死等病理改变，说明酒精性肝损伤模型制备成功。肝脏MDA含量升高，SOD水平明显下降，表明酒精诱导大鼠肝脏出现氧化应激损伤。

给予益心酮保护后，大鼠血清转氨酶活性明显降低，肝组织病理改变明显好转，说明益心酮能保护肝细胞，稳定细胞膜的结构和功能，对酒精性肝损伤有一定的保护作用。本研究结果还显示，益心酮能显著降低酒精导致的大鼠肝组织MDA含量升高，提高肝组织SOD水平，表明益心酮具有较强的清除自由基、抑制脂质过氧化反应的能力，通过增强抗氧化酶的抗氧化能力，抑制自由基介导的脂质过氧化反应，对酒精性肝损伤有确切的保护作用。

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R944.4

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1004-6879（2015）03-0257-03

2014-12-04）