水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的快速测定

冯魁+艾佳俊

孔雀石绿、结晶紫是有毒的三苯甲烷类化学物，农业部将它们列为水产上的禁药。然而由于其对鱼体水霉病和鱼卵的水霉病有特效，许多水产业养殖户仍在违规使用。因此，农业部将孔雀石绿、结晶紫列为水产品检测的重点项目。

本文依据农业部公告SNT 1768-2006《水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的快速测定方法》，采用智能化食品安全一体机进行前处理，经过固相萃取技术浓缩净化，再用高效液相色谱仪检测。大大减少检测步骤和检测时间，可用于水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的应急筛查和常规检测。

试剂和材料

标准品：孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫纯度大于98%，均来自中国水产科学研究院。

孔雀石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盒（北京六角体科技发展有限公司），其中包括提提取剂、液体提取剂、固相萃取柱、洗脱剂。

其余试剂均为色谱纯。

仪器和设备

高效液相色谱仪：配紫外-可见光可变波长检测器；检测波长时间程序可控。

智能化食品安全一体机。

液相色谱条件和实验步骤

色谱柱：C18柱，4.6mm×150mm （d.i），粒度5?m；

流动相：乙腈+乙酸盐缓冲液（80+20，V/V）；

流速：1.0mL/min；

柱温：室温；

进样量：20?L。

检测波长时间程序：0min～5.0 min，618nm；5.0min～12min，588nm；12min～18min，267nm；孔雀石绿的检测波长为618nm，结晶紫的检测波长为588nm，隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的检测波长为267nm。

鱼取肉质部分，虾去壳。取样品5.00g于通道1搅拌杯中，再加入一瓶固体提取剂，并连接底座和固相萃取柱。将搅拌杯置入仪器。设置各项参数为：搅拌时间1：1（s）、搅拌间歇1：30（s）、搅拌次数1：5、提取剂量1：10（mL）、搅拌时间2：1（s）、搅拌间歇2：30（s）、搅拌次数2：2、提取剂量2：20（mL）、萃取时间：60（s）、气压档位：8。

取下固相萃取柱，加入1mL洗脱剂洗脱。旋转蒸干后，加入1mL流动相复溶，进样分析。

结果与讨论

色谱测定

在上述色谱条件下，孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的保留时间约为孔雀石绿4.0min、隐色孔雀石绿13.6min、结晶紫5.4min、和隐色结晶紫14.7min。

绘制标准工作曲线

移取孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫混合标准溶液，用流动相稀释成0、2ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL标准工作溶液，用高效液相色谱仪测定，得出标准工作曲线。线性系数0.996，y=1088.2x+5843.3。

孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测限均为2.0μg/kg。

样品检测结果计算

取鱼、虾样品，按实验方法处理后，用色谱数据处理机或按式（1）分别计算供试样品中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫残留量。

2

ω= ci …… （1）

5

ω-水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫残留量，μg/kg；

ci-标准曲线上查出试样溶液中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫标准工作溶液的浓度，μg/L；

2/5-换算常数。

实际检测10个以上样品，得出方法回收率为：85%～105%。