脑心清片对缺血性心脏病患者外周血中内皮祖细胞功能的影响

冯杰 涂军荣 王焱

(1.云南省食品药品监督管理局药品认证中心 云南昆明 650101;2.佛上市三水区人民医院心内科 广东佛山 528527;3.广东食品药品职业技术学校 广东广州 510500)

缺血性心脏病患者外周血中EPCs数量减少、功能受损,与血管内皮功能障碍密切相关[1、2]。脑心清片是广州白云山和记黄埔中药有限公司生产的柿叶提取物制剂。有研究表明,脑心清片具有良好的防治动脉硬化症作用[3],并可以抑制高血压引起的颈动脉重构[4]。本文旨在研究脑心清片对缺血性心脏病患者外周血中EPCs数量及功能的影响。

1 材料与方法

(1)临床资料:选取2013年9月～2013年12月在本院住院的被确诊为IHD患者40例,其中男17例、女23例,年龄(64.0±5.5)岁,入选者均伴有胸痛,冠脉造影显示至少一支冠脉狭窄>50%,其中单支病变13例,2支病变17例,3支病变10例。将入选患者按照电脑随机数字表的方法随机分为脑心清组30例和贝那普利组10例。脑心清组给予脑心清片4片Tid(广州白云山和记黄埔中药有限公司)贝那普利组给予贝那普利10mg/d(北京诺华公司),治疗12周。两组性别(男/女)比例是脑心清组13/17,贝那普利组4/6,无显著差异。其他基本资料如年龄、吸烟、血脂、糖尿病等亦无统计学差异(见表1)。

(2)EPCs的分离、培养和鉴定:患者的静脉血样取至治疗开始前和治疗结束后,采用密度梯度离心法分离单核细胞,置于涂有人HFN的24孔培养板中,用EBM-2培养,4d后换培养液,至d7时将贴壁细胞用DiLDL(2.4ug/ml)在37℃温育1h,然后用2%多聚甲醛固定10min,再用FITC-UEA-I(10ug/ml)温育1h。双染色阳性者为正在分化的EPCs,每孔随机选取3个视野(200倍)计数EPCs。

(3)粘附能力的检测:用0.1%胰酶消化后收集EPCs,悬浮于500ulEBM-2培养液中计数。将同密度的EPCs接种在涂有人HFN的24孔培养板中,37℃下培养30min,计贴壁细胞数。

(4)EPCs迁移能力检测:用0.1%胰酶消化后收集EPCs,悬浮于500ulEBM-2培养液中计数。在Boyden小室的下室中注入500ul EBM-2培养液,在上室中注入含有2×104EPCs悬浮细胞的EBM-2培养液50ul。在37℃培养24h,去除上室和滤膜未移动的细胞,将底层细胞用甲醇固定后进行Giemsa染色,计数。

(5)体外血管生成能力的检测:在倒置显显微镜下计数小血管生成细胞,EPCs细胞长度超过宽度的4倍以上即可被认为形成小血管。

(6)统计学方法:各组计量资料均以(x±S)表示,计数资料用x2检验,计量资料用t检验,单因素相关性分析,P< 0.05被认为有统计学差异。

2 结果

(1)治疗前后两组EPCs数量比较:在荧光显微镜下计数双染色阳性者,即正在分化的EPCs数量,脑心清组治疗前为(162±33)个/视野,治疗后为(219±48)个/视野,治疗前后比较有显著差异(P<0.05)。

(2)治疗前后EPCs的功能比较:两组治疗后,EPCs粘附、迁移、血管生成细胞比较,EPCs功能显著提高,脑心清组相比贝那普利组的血管生成细胞略低,但没有统计学差异,见表2。

3 讨论

外周血中的内皮祖细胞EPCs可参与出生后的新生血管形成和损伤血管的再内皮化过程,对内皮修复、维持血管稳定的功能具有重要作用[5]。IHD患者的EPCs数量减少及功能损伤会导致冠状动脉自身修复能力降低与缺血心肌新生血管减少[1]。前期研究发现脑心清片改善冠心病患者的内皮功能可能与调节血脂、抗血小板聚集和抗氧化的综合作用有关[6]。

表1 两组患者基本资料比较(x±S)

表2 两组治疗前后各参数比较(x±S)

本研究首次发现,脑心清片可以提高IHD患者外周血中EPCs数量并改善其粘附能力、迁移能力和体外生成血管能力。这可能是脑心清片改善血管内皮功能的机制之一。至于脑心清片提高EPCs数量和功能是否与上调SDF-1水平和CXCR4的表达有关,有待进一步的研究。

[1]陈海波,张淑霞.缺血性心脏病患者外周血中内皮祖细胞数量和功能的变化[J].河北医学,2007,13(6):689-691.

[2]Yao EH,Fukuda N,Matsumoto T,et al.Losartan improves the impairedfunction of endothelial progenitor cells in hypertension via an antioxidanteffect[J].Hypertens Res,2007;30(11):1119-28.

[3]李楚源,贝伟剑,刘昌孝,等.脑心清片防治脑动脉硬化研究进展[J].药物评价研究,2010,33(4):296-301．

[4]吴玉玲,张锐,黄美兰.脑心清对自发性高血压大鼠血压、血小板聚集及颈动脉重构的影响[J].中药材,2013,36(6):982-5.

[5]崔斌,黄岚,宋耀明,等.冠心病患者循环内皮祖细胞与相关危险因素及冠状动脉病变的关系[J].中华心血管病杂志,2005,33:785-788.

[6]梁斯碧,万贞.脑心清片治疗冠心病变异型心绞痛临床疗效及内皮功能的影响[J].广东药学,2004,14(6):39-41.