气相色谱-质谱联用法测定蛇床子超临界二氧化碳流体提取物中蛇床子素含量*

张任，陈琴华，，朱军，余飞，

(湖北医药学院附属东风医院1.肾病内科；2.药物分析与筛选研究所，十堰 442008)

气相色谱-质谱联用法测定蛇床子超临界二氧化碳流体提取物中蛇床子素含量*

张任1，陈琴华1，2，朱军2，余飞1，2

(湖北医药学院附属东风医院1.肾病内科；2.药物分析与筛选研究所，十堰 442008)

目的 建立气相色谱-质谱联用法测定蛇床子超临界二氧化碳(CO2)流体提取物中蛇床子素的含量。方法 样品采用CO2超临界流体萃取，萃取液用乙酸乙酯溶解，选择监测离子法测定蛇床子素的含量。色谱条件：DB-5MS(30 m×0.32 mm，0.25 μm)石英毛细管色谱柱；柱流速2.0 mL·min-1，柱温60 ℃保持2 min，以10 ℃·min-1到280 ℃，保持6 min；进样口和接口温度为280 ℃。结果 蛇床子素在5～1 000 μg·mL-1线性关系良好，r=0.999 1，平均回收率为98.97%，检测限1.0 ng·mL-1。结论 该方法稳定可靠，适用于蛇床子药材的质量控制。

蛇床子；蛇床子素；色谱-质谱，气相

1 仪器与试药

1.1 仪器 HA220-50-06超临界萃取装置(南通市华安超临界萃取有限公司)；GCMS-QP2010型气相色谱-质谱联用仪(日本岛津公司)，工作站为GCMSsolution 2.10，DB-5(30 m×0.32 mm×0.25 μm)毛细管气相色谱柱(安捷伦公司)；SK-1型快速混匀器(江苏国华仪器厂)；AS3120超声仪。

1.2 试药 蛇床子素(中国食品药品检定研究院，批号：110822 - 20040)；蛇床子购置西安市中药材公司，伞形科植物蛇床(CnidiummonnieriL.Cuss.)的干燥果实；高纯氦气(昆山普克莱斯实用气体有限公司，其纯度≥99.999%)；乙酸乙酯(分析纯，西安化学试剂厂)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 DB-5(30 m×0.32 mm，0.25 μm)毛细管气相色谱柱为分析柱；以高纯氦气为载气，流速2.0 mL·min-1；进样口温度280 ℃，程序升温：起始温度60 ℃，保持2 min，以10 ℃·min-1速率升温至280 ℃，保持6 min；进样量为1 μL，接口温度280 ℃，EI源温度200 ℃，电子轰击能量为70 eV，采集延时2.5 min；定性分析：进样方式为分流进样，分流比为50：1，定量分析：进样方式不分流进样，质荷比(m/z)为244(蛇床子素)。

2.2 对照品溶液制备 精密称取蛇床子素对照品20 mg，置于10 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，并稀释至刻度，作为对照品贮备液。配制蛇床子素对照品贮备液，浓度均为1.0 mg·mL-1，按要求稀释成一系列浓度分别为5，10，50，100，500，1 000 μg·mL-1的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 取干燥的蛇床子药材，粉碎后过孔径1.18 mm筛。称取药材1 250 g，投入萃取釜(5 L)，对萃取釜、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ分别加热，并启动冷机制冷。当温度分别达到萃取釜45 ℃、分离釜Ⅰ40 ℃、分离釜Ⅱ36 ℃时，CO2经冷机储罐冷凝后，通过高压泵打入萃取釜和两个分离釜，流速45～50 L·h-1。当萃取釜和分离釜的压力分别达到30，5，5 MPa时，开始循环萃取。并保持恒温恒压，萃取2.0 h后，从分离釜Ⅰ出料口放出黄棕色液体[4]。总萃取率为6.4%。精密称取其超临界提取物100 mg，置100 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.4 方法学考察

2.4.1 色谱条件的确立 在上述色谱条件下，蛇床子素对照品进样分析，其全离子扫描色谱图见图1，在18.3 min对应的质谱图见图2，经GCMSsolution 2.10版软件里的NIST147检索，其为蛇床子素，相似度达98%。从质谱图可见，其碎片质谱离子有m/z244，229，213，189，159，131和115。蛇床子素相对分子质量为244，从图2看见，m/z244和229丰度较高，考虑样品中碎片离子的干扰，选择分子离子峰m/z244作为定量监测离子进行分析。

Fig.1 Total ion current chromatogram of osthole by GC-MS full scan

2.4.2 线性关系考察 取“2.2” 项下的系列浓度的对照品，按上述分析条件进样1 μL，以蛇床子素的峰面积为纵坐标(Y)，以质量浓度为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程，蛇床子素：Y=9 895.7X-16 459，r=0.999 1。结果表明蛇床子素在5～1 000 μg·mL-1内呈良好的线性关系，S/N=3时，测得蛇床子素的检测限为0.1 ng·mL-1。

2.4.3 精密度实验 取“2.2” 项下3个浓度的对照品溶液5 μg·mL-1(低浓度)、100 μg·mL-1(中浓度)和1 000 μg·mL-1(高浓度)，按上述分析条件进样1 μL，连续进样5次，计算蛇床子素的峰面积的RSD，蛇床子素高、中、低浓度的RSD分别为1.42%，1.31%，2.18%，精密度均良好。

2.4.4 重复性实验 按“2.3” 项下分别制备供试品溶液6份，按上述分析条件进样1 μL，以蛇床子素含量计算RSD为1.45%，表明重复性良好。

2.4.5 稳定性实验 取样品溶液，分别于0，1，2，4，8 h进样，计算蛇床子素的RSD，其RSD为1.80%，被分析化合物在8 h为稳定。

2.4.6 加样回收率实验 精密量取同一样品(20.12 μg·mL-1)0.5 mL，共6份，每份加入浓度26.6 μg·mL-1对照品溶液0.5 mL，按供试品溶液的处理方法提取得供试品溶液，进样测定，按外标法以峰面积计算回收率见表1。其平均回收率为98.97%，RSD为1.24%。

表1 蛇床子素加样回收率结果

2.5 样品的测定 取“2.3” 项下制备的3个样品，按照“2.4.1” 项下色谱条件进行测定，其含量分别12.9，12.7和13.2 mg·g-1，平均含量为12.9 mg·g-1。

3 讨论

超临界萃取法尤其适用于中草药的提取精制，而且超临界提取得到目标物纯净，无需太多处理就可直接进样。笔者采用GC-MS选择离子监测法测定蛇床子中蛇床子素的含量，从色谱图可以看出，其专一性强，相关系数和回收率达到了含量测定的要求，而且检测限低(1.0 ng·mL-1)，可以用来测定蛇床子素含量。

[1] 吴芳，刘新宇，范国荣.等.蛇床子有效成分的RP-HPLC测定及其1种提取方法的比较研究[J].中国野生植物资源，2000，20(6)：32-33.

[2] 李鹏，陈琴华，朱军，等.高效液相色谱法测定利夫康洗液中蛇床子素的含量[J].医药导报，2011，30(6)：785-786.

[3] 陈琴华，胡文姬，王众勤，等.反相高效液相色谱法测定洁尔阴洗液中蛇床子素含量[J].中国药业，2010，19(19)：29-30.

[4] 宫竹云，张高勇，聂永亮，等.超临界CO2萃取工艺对蛇床子素提取物提取率的影响[J].中成药，2006，28(8)：1102-1105.

DOI 10.3870/yydb.2015.01.027

Quantitative Determination of Osthole in Supercritical CO2Fluid Extracts ofCnidiummonnieriby Gas Chromatography-Mass Spectrometry

ZHANG Ren1, CHEN Qinhua1,2, ZHU Jun2, YU fei1,2

(1.RenalMedicine; 2.InstituteofPharmaceuticalAnalysisandDrugScreening,AffiliatedDongfengHospital,HubeiUniversityofMedicine,Shiyan442008,China)

Objective To establish a method for content determination of osthole fromCnidiummonnieriin supercritical fluid CO2(SFE-CO2) extract by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Methods The sample was extracted fromCnidiummonnieriby SFE-CO2and solved by acetic ether.The content of ostholei determined by GC-MS with selected ion monitor(GC-MS/SIM).Separation was performed on DB-5MS capillary column (30 m×0.32 mm，0.25 μm) at the flow rate of 2.0 mL·min-1.The column temperature was started at 60 ℃ for 2 min, then increased to 280 ℃ at 10 ℃·min-1and maintained at 280 ℃ for 6 min.The temperature of both interface and inlet was kept at 280 ℃. Results The linear range of osthole was within 5-1 000 μg·mL-1(r=0.999 1).The mean extraction recovery was 98.97% and limit of detection was 1.0 ng·mL-1. Conclusion The method is reliable and stable,which can be applied to quality control of Cndium monnieri.

Cnidiummonnieri; Osthole; Chromatography-mass spectrometry, gas

2013-11-28

2014-03-21

*湖北省卫生厅青年科技人才项目(QJX2012-45)；湖北省教育厅科研计划项目(D20132106)

张任(1981-)，男，湖南衡阳人，主治医师，学士，研究方向：肾病学与药学。电话：0719-8272348，E-mail：113830202@qq.com。

陈琴华(1976-)，男，湖北荆门人，副主任药师，博士，研究方向：药物分析学。电话：0719-8272351，E-mail：cqh77@163.com。

R282.71；R927.2

B

1004-0781(2015)01-0102-03